免疫學(xué)研究進(jìn)展匯總十篇

序論：好文章的創(chuàng)作是一個(gè)不斷探索和完善的過(guò)程，我們?yōu)槟扑]十篇免疫學(xué)研究進(jìn)展范例，希望它們能助您一臂之力，提升您的閱讀品質(zhì)，帶來(lái)更深刻的閱讀感受。

篇（1）

許多流行病學(xué)調(diào)查提示白癜風(fēng)的發(fā)生具有明顯的家族聚集性，遺傳模式并不遵守孟德?tīng)栠z傳規(guī)律[1]，而是一種多基因或多因素遺傳疾病，因此其免疫學(xué)遺傳背景也呈現(xiàn)出多樣化。HLA II類等位基因常與白癜風(fēng)有關(guān)，尤其是HLA DR4與其關(guān)系較為密切。涉及抗原遞呈及加工的基因也出現(xiàn)在白癜風(fēng)中，如低分子量多肽1/7（LMP-1/7）、抗原遞呈轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白1/2(TAP-1/2) [2]。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原4（CTLA-4）通過(guò)下調(diào)T淋巴細(xì)胞的激活從而控制T細(xì)胞凋亡及抑制免疫反應(yīng)，而某些CTLA-4多態(tài)性與白癜風(fēng)有關(guān)，但只發(fā)生在伴有其他免疫疾病的白癜風(fēng)中，提示白癜風(fēng)的免疫機(jī)制可能并不與所有白癜風(fēng)的發(fā)生有關(guān)[3]。多項(xiàng)研究利用全基因組關(guān)聯(lián)分析研究白癜風(fēng)及其他自身免疫疾病的家族鑒定出白癜風(fēng)免疫易感基因座包括染色體1、7、8及17分別命名為AIS1、AIS2、AIS3及SLEV1[4]。最近張學(xué)軍等[5]在人類基因組的3個(gè)區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)與白癜風(fēng)發(fā)病密切相關(guān)的基因，包括人類白細(xì)胞抗原（HLA）B/C和III區(qū)域的2個(gè)等位基因及相應(yīng)的單倍型（H1和H5）、6號(hào)染色體區(qū)域的RNASET2，F(xiàn)GFR1OP和CCR6、10號(hào)染色體區(qū)域的ZMIZ1，其中HLA基因及CCR6與人類自身免疫病發(fā)生密切相關(guān)，該研究成果在國(guó)際上首次明確白癜風(fēng)屬自身免疫性疾病。

臨床觀察也表明，多數(shù)泛發(fā)型白癜風(fēng)常常與其他自身免疫性疾病并發(fā)，更直觀地支持該病的免疫學(xué)基礎(chǔ)。已報(bào)道的與白癜風(fēng)相關(guān)的自身免疫疾病包括：自身免疫甲狀腺疾病、自身免疫多內(nèi)分泌綜合癥I/II、I型糖尿病，Adisson'綜合癥、斑禿、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病以及肌無(wú)力等，但以自身免疫甲狀腺疾病的伴發(fā)率最高。Alkhateeb 等[6]調(diào)查了2624名畢加索白癜風(fēng)患者，發(fā)現(xiàn)30%的患者至少伴發(fā)一種其他自身免疫疾病，而以自身免疫性甲狀腺病最多（19.4%）。另外兩項(xiàng)研究分別涉及80例土耳其患者和144例日本患者，結(jié)果顯示分別有55%和23.5%的白癜風(fēng)患者伴發(fā)其他自身免疫疾病，同樣是自身免疫甲狀腺疾病的伴發(fā)率最高[7-8]。Uncu 等[9]進(jìn)一步分析了兒童白癜風(fēng)與自身免疫性甲狀腺炎的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)8%的患兒（均為女孩）伴發(fā)自身免疫性甲狀腺炎（對(duì)照組0%，P=0.041），而在家族性白癜風(fēng)中，這種情況更為明顯。Greggory[10]研究了133個(gè)泛發(fā)型白癜風(fēng)家族，即多家族成員發(fā)生泛發(fā)型白癜風(fēng)，指出其家族成員發(fā)生白癜風(fēng)[21.5±15.0）歲，中位數(shù)18.5]相較于隨機(jī)選擇的白癜風(fēng)患者[（24.2±16.2)歲，中位數(shù) 22.0]發(fā)病年齡更小。36.8%的先證者同時(shí)伴發(fā)其他自身免疫疾病，頻率最高的疾病仍為自身免疫性甲狀腺疾病（22.6%）。此外，在這些家族中，患者同胞發(fā)展其他自身免疫疾病的頻率也較高（37.5%），而尤其見(jiàn)于先證者同時(shí)伴發(fā)其他自身免疫疾病（41%）。這些都反映出白癜風(fēng)作為多自身免疫疾病的重要成員，可能與其他自身免疫疾病具有相同的遺傳學(xué)基礎(chǔ)。

2細(xì)胞因子

細(xì)胞因子與相應(yīng)的受體結(jié)合，在介導(dǎo)天然免疫和適應(yīng)性免疫、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方面起著重要作用。多項(xiàng)研究檢測(cè)了白癜風(fēng)中細(xì)胞因子表達(dá)變化,結(jié)果表明白癜風(fēng)外周血單核細(xì)胞表達(dá)IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α明顯增高[11-12]，并且IL-1α、IL-6、IFN-γ及TNF-α表達(dá)在白癜風(fēng)皮損區(qū)均上調(diào)[13-14]。可溶性IL-2R（sIL-2R）和IL-17在患者外周血及皮損中均增高，且外周血sIL-2R在進(jìn)展期中表達(dá)高于穩(wěn)定期，外周血及皮損中IL-17表達(dá)均與疾病持續(xù)時(shí)間和程度呈正相關(guān)，外周血中IL-17水平還與疾病受累面積呈正相關(guān)[15-17]。細(xì)胞因子表達(dá)在不同型別的白癜風(fēng)中也有所不同，如尋常型（局灶型及泛發(fā)型）白癜風(fēng)患者血中IL-6、GM-CSF表達(dá)高于節(jié)段型白癜風(fēng)[18]。這些前炎癥因子的表達(dá)增高，在趨化中性粒細(xì)胞至皮損區(qū)、促進(jìn)白細(xì)胞-黑素細(xì)胞粘附、激活細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞等過(guò)程中發(fā)揮重要作用，從而加速免疫損傷推動(dòng)疾病的進(jìn)程。IL-17作為一個(gè)較新的細(xì)胞因子，可能與TH1型T淋巴細(xì)胞協(xié)調(diào)誘導(dǎo)自身免疫疾病。此外由于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能調(diào)控初始CD4+T淋巴細(xì)胞向TH17型T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化并產(chǎn)出IL-17，IL-17與白癜風(fēng)的特殊關(guān)系可間接反映出調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能異常[19]。

Grimes等[20]利用他克莫司軟膏外用治療白癜風(fēng)皮損24周后，原脫色區(qū)及鄰近部位TNF-α的表達(dá)明顯下降(P ＜0.001)，而在另一項(xiàng)他克莫司研究中，白癜風(fēng)患者治療12周后，除了臨床癥狀得到改善，平均皮損縮小(41.0±5.2）%，治療皮損IL-10表達(dá)較未治療皮損（P=0.017）及正常皮膚（P=0.004）均明顯增高[21]，這些研究均表明皮膚局部炎癥因子的失衡在白癜風(fēng)發(fā)生中起到一定作用，糾正細(xì)胞因子的表達(dá)有利于白癜風(fēng)的復(fù)色。雖然白癜風(fēng)中外周血及皮損區(qū)細(xì)胞因子表達(dá)變化在不同研究中結(jié)果有所差異，但是總體傾向于TH1型炎癥因子。逆轉(zhuǎn)TH1型細(xì)胞因子向TH2型變化不僅是他克莫司治療白癜風(fēng)的機(jī)制之一，同時(shí)也體現(xiàn)出TH1型細(xì)胞因子及其介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在白癜風(fēng)發(fā)病中起到較大的作用。

3細(xì)胞免疫

3.1 外周血T淋巴細(xì)胞：白癜風(fēng)外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量及比例在不同的文獻(xiàn)中存在較大差異，這可能與研究人群及疾病特征有關(guān)，如疾病的活動(dòng)性及伴有其他免疫疾病可能影響外周血細(xì)胞比例及分類。早期一項(xiàng)研究表明隨機(jī)選擇的白癜風(fēng)中CD4+T細(xì)胞數(shù)量及CD4+/CD8+ T細(xì)胞較正常人明顯下降（P＜0.01）[22]，而近期一項(xiàng)研究分析了40例非節(jié)段性白癜風(fēng)（其中21例患者為活動(dòng)期，19例為穩(wěn)定期）的外周血淋巴細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)CD3+、 CD4+、CD8+ T細(xì)胞計(jì)數(shù)沒(méi)有改變，而CD4+/CD8+ 上升（其中位數(shù)為2.6，正常值2.4）[23]。這些研究結(jié)果都表明白癜風(fēng)與淋巴細(xì)胞失衡密切相關(guān)。另外，兩項(xiàng)研究比較了非節(jié)段性白癜風(fēng)患者與正常人外周血中T細(xì)胞亞群變化，結(jié)果均示CD45RA+T細(xì)胞明顯下降，而CD45RO+T細(xì)胞明顯增高[24-25]，表明白癜風(fēng)外周血中T細(xì)胞呈激活記憶狀態(tài)，也反映了免疫機(jī)制在白癜風(fēng)中起到一定作用。Basak[26]的研究同樣表明白癜風(fēng)患者CD45RO+T細(xì)胞較正常人增多（P=0.022）, 并且CD45RO+ 細(xì)胞在伴有自身免疫疾病的白癜風(fēng)患者中的表達(dá)明顯高于無(wú)其他自身免疫疾病的患者(P=0.042)，同樣的結(jié)論在有家族史的患者中得到體現(xiàn)(P＜0.001)。因此，在白癜風(fēng)患者外周血中，淋巴細(xì)胞普遍以記憶T淋巴細(xì)胞形式存在，并且當(dāng)伴有其他免疫因素下表現(xiàn)更為明顯，反映出白癜風(fēng)患者的免疫系統(tǒng)在某些抗原信息的刺激下已呈激活狀態(tài)。此外，多項(xiàng)研究利用黑素細(xì)胞分化抗原，Melan-A/MART、gp100及tyrosinase，在HLA-A2 限制性的白癜風(fēng)患者外周血中均檢測(cè)到特異的CD8+T淋巴細(xì)胞，這些細(xì)胞與疾病的活動(dòng)性成正相關(guān)，不僅能特異性識(shí)別黑素細(xì)胞分化抗原，表達(dá)歸巢受體CLA，對(duì)黑素細(xì)胞有較高的親和力，同時(shí)能在體外對(duì)黑素細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒作用[27-29]，特異CD8+T淋巴細(xì)胞的存在與TH1型細(xì)胞因子表達(dá)增高相一致，均體現(xiàn)了細(xì)胞免疫在白癜風(fēng)病因?qū)W中的重要性。

3.2 局部浸潤(rùn)T淋巴細(xì)胞：雖然在不同研究中，白癜風(fēng)患者外周血中淋巴細(xì)胞的分類存在差異，但在皮損局部的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)模式較為統(tǒng)一，即泛發(fā)型白癜風(fēng)中，皮損及皮損周圍以CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主。有報(bào)道利用免疫組化技術(shù)分析了白癜風(fēng)局部皮損的免疫浸潤(rùn)模式，發(fā)現(xiàn)在圍皮損區(qū)T淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)最為顯著。在圍皮損區(qū)表皮基底層及真皮周圍等尚殘存黑素細(xì)胞的部位，大部分T淋巴細(xì)胞為CD45RO+，且主要為CD8+T淋巴細(xì)胞（平均CD4 /CD8:0.48），其數(shù)量較正常皮膚明顯增多（P＜0.005）。利用NKI-beteb/CD8標(biāo)記免疫組化，檢測(cè)到CD8+T淋巴細(xì)胞位于黑素細(xì)胞及其殘?bào)w周圍，表達(dá)歸巢受體CLA，而與黑素細(xì)胞接觸的CD8+T淋巴細(xì)胞多數(shù)表達(dá)穿孔素（66±14）%及顆粒酶（60±34）%[30]。因此研究者認(rèn)為皮膚歸巢的CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)黑素細(xì)胞的細(xì)胞毒作用成了白癜風(fēng)重要的發(fā)病機(jī)制。

體外分離白癜風(fēng)圍皮損區(qū)T淋巴細(xì)胞，結(jié)果提示其浸潤(rùn)的T淋巴細(xì)胞主要為CD8+T淋巴細(xì)胞。利用非特異性刺激后，圍皮損區(qū)來(lái)源的T淋巴細(xì)胞分泌INF-γ、TNF-α 等TH1型細(xì)胞因子，而正常皮膚來(lái)源的T淋巴細(xì)胞無(wú)此模式，因此，更進(jìn)一步支持了白癜風(fēng)趨向于TH1免疫類型。此外，分離培養(yǎng)的CD8 T淋巴細(xì)胞能對(duì)自身來(lái)源的黑素細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，利用抗HLA I抗體阻斷這種作用，證實(shí)白癜風(fēng)中CD8+T淋巴細(xì)胞對(duì)黑素細(xì)胞的細(xì)胞毒效應(yīng)是HLA限制性的[31]。Van den Boorn[32]在前人的研究基礎(chǔ)上進(jìn)行了擴(kuò)大研究，表明T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷導(dǎo)致黑素細(xì)胞的丟失，而并非是各種因素的作用結(jié)果。圍皮損區(qū)分離培養(yǎng)的T淋巴細(xì)胞及外周血單核細(xì)胞能以HLA限制性方式特異性識(shí)別黑素細(xì)胞分化抗原構(gòu)成的肽四聚體（酪氨酸酶、gp100、melan A/MART-1），并表達(dá)CD69、CD137、顆粒酶B、CD107a及TH1細(xì)胞因子INF-γ、TNF-α。但正常人皮膚來(lái)源的T淋巴細(xì)胞和流感抗原刺激下的任何T淋巴細(xì)胞均不能表達(dá)上述分子。提示白癜風(fēng)中T淋巴細(xì)胞能特異性識(shí)別黑素細(xì)胞分化抗原并激活。將皮膚移植塊與自體培養(yǎng)的圍皮損來(lái)源的完全成分的T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、清除了CD8+T淋巴細(xì)胞后的細(xì)胞共培養(yǎng)后，在前兩種共培養(yǎng)模式下檢測(cè)到大部分黑素細(xì)胞的凋亡，伴少量角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡，而后者共培養(yǎng)僅檢測(cè)到少量黑素細(xì)胞凋亡，表明了在白癜風(fēng)中主要是CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)了黑素細(xì)胞的缺失。由于角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡并未發(fā)生在不含黑素細(xì)胞的皮損區(qū)，角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡僅僅是旁效應(yīng)作用，因此CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用依賴于特異性的黑素細(xì)胞抗原。利用激光掃描共聚焦顯微鏡，觀察到CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)到表皮及真皮，造成表真皮連接的損害及黑素細(xì)胞的丟失。因此,該研究證實(shí)了CD8+T淋巴細(xì)胞能特異性識(shí)別黑素細(xì)胞分化抗原并進(jìn)一步激活，浸潤(rùn)至黑素細(xì)胞周圍發(fā)揮細(xì)胞毒作用，從而介導(dǎo)細(xì)胞免疫效應(yīng)，更為直接的論證了CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫機(jī)制在白癜風(fēng)發(fā)病中的重要作用。在這個(gè)過(guò)程中，涉及大量的細(xì)胞因子和復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制，都可能成為免疫治療的研究方向。

3.3 調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞：盡管已表明CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在白癜風(fēng)中發(fā)揮重要作用，但是僅存在CD8+T淋巴細(xì)胞并不能維持泛發(fā)性白癜風(fēng)的發(fā)生。人體調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)會(huì)利用反饋機(jī)制對(duì)抗異常的免疫反應(yīng)，如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能通過(guò)細(xì)胞因子TGF-β抑制自身反應(yīng)的免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者外周血中TGF-β較正常人明顯降低(P=0.004)，推測(cè)白癜風(fēng)中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能可能受損，而不能抑制過(guò)激的免疫反應(yīng)，造成自身免疫損傷[33]。而Klarquist等[34]比較了白癜風(fēng)患者皮膚的調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞在浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中的比例，發(fā)現(xiàn)不論在非皮損區(qū)(2.6±3.5)%，圍皮損區(qū)(2.0±1.6)%還是皮損區(qū)(7.3± 13.9)%，白癜風(fēng)患者皮膚中的調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞較正常人皮膚(46.2±37.8)%明顯降低。通過(guò)檢測(cè)對(duì)抗CD4+T細(xì)胞增殖能力，發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞功能并未受損，細(xì)胞表達(dá)的趨化因子受體CCR4、CCR5、CCR8 及CLA也未存在異常。而白癜風(fēng)皮膚中趨化因子CCL22表達(dá)比正常人皮膚降低了43%，因此作者推測(cè)趨化因子CCL22的降低可能導(dǎo)致白癜風(fēng)皮膚中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞表達(dá)降低，從而不能調(diào)控免疫反應(yīng)。在白癜風(fēng)中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞是否存在功能異常，其作用地位如何仍需要進(jìn)一步研究。

4 體液免疫

在白癜風(fēng)外周血中常常檢測(cè)到自身抗體的存在。這些抗體的靶抗原包括黑素小體內(nèi)的酪氨酸酶、gpl00、酪氨酸酶相關(guān)蛋白(TRP-1/2) 以及黑素集合激素受體1 (MCHR1)等，其中MCHR1是較新發(fā)現(xiàn)的B細(xì)胞的自身抗原，可表達(dá)于黑素細(xì)胞表面。研究表明MCHR1抗體能阻斷該受體對(duì)黑素集合受體(MCH)的反應(yīng)，從而影響黑素細(xì)胞功能及黑素生成[35]。而MCHR1抗體是否與白癜風(fēng)發(fā)病有直接關(guān)系仍需要進(jìn)行深入研究。

白癜風(fēng)涉及的抗體主要為IgG，包括IgG1、IgG2 及IgG3。最近一項(xiàng)研究分析了白癜風(fēng)患者血清免疫球蛋白譜，發(fā)現(xiàn)IgG和IgA水平明顯降低(P＜0.05)，但是IgM沒(méi)有變化，并且IgG的濃度與脫色斑數(shù)量有關(guān)。進(jìn)一步表明了IgG可能涉及白癜風(fēng)發(fā)病[36]。利用DNA含量測(cè)定，白癜風(fēng)來(lái)源的IgG（32.16±6.24）%較正常來(lái)源的IgG(1.33±0.82）%能誘導(dǎo)更多的黑素細(xì)胞凋亡（P＜ 0.0001)。將黑素細(xì)胞與IgG共培養(yǎng)后，白癜風(fēng)來(lái)源的IgG(62.66±8.68）%也較正常來(lái)源 IgG (1.83±1.17）%更能滲透入黑素細(xì)胞（P＜0.0001）[37]。這些結(jié)論表明各種抗體不僅能以ADCC作用方式介導(dǎo)黑素細(xì)胞損傷，同時(shí)可能滲透入細(xì)胞內(nèi)而誘導(dǎo)其凋亡。

白癜風(fēng)中抗體的表達(dá)還與疾病活動(dòng)性及嚴(yán)重度有關(guān)，在一項(xiàng)研究中，利用酶聯(lián)免疫法，抗黑素細(xì)胞IgG在80%的活動(dòng)性白癜風(fēng)外周血中表達(dá)，而在穩(wěn)定期白癜風(fēng)及健康者中未出現(xiàn)。而另一研究組利用免疫共沉淀法檢測(cè)到在輕（受累面積＜2%）、中（受累面積2%～5%）、重（受累面積＞5%）患者外周血中IgG出現(xiàn)率分別為50%、90%及93%。但也有研究報(bào)道白癜風(fēng)中抗黑素細(xì)胞的IgA水平而不是IgG與活動(dòng)性有關(guān)[38]。雖然白癜風(fēng)中檢測(cè)到各種針對(duì)黑素細(xì)胞抗原的抗體，但是目前為止還沒(méi)有任何一種抗體被認(rèn)為起主要作用，而抗體檢查對(duì)于白癜風(fēng)的輔助診斷及疾病進(jìn)展判斷仍有一定的作用。

5 總結(jié)

白癜風(fēng)屬自身免疫性疾病，其發(fā)生與多個(gè)免疫相關(guān)的等位基因密切相關(guān)。外周血及皮損中細(xì)胞因子的表達(dá)變化促進(jìn)了免疫反應(yīng)及炎癥反應(yīng)的進(jìn)展，尤其是皮損區(qū)TH1型細(xì)胞因子的表達(dá)上調(diào)增強(qiáng)了細(xì)胞免疫效應(yīng)。受疾病的活動(dòng)性等因素影響，外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量及比例存在較大的差異，但淋巴細(xì)胞普遍呈激活狀態(tài)。皮損局部浸潤(rùn)的CD8+T淋巴細(xì)胞能特異性識(shí)別黑素細(xì)胞分化抗原，進(jìn)而激活并介導(dǎo)對(duì)黑素細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，是白癜風(fēng)中黑素細(xì)胞丟失的重要原因。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞作為其中的調(diào)節(jié)因素，其數(shù)量在皮損中表達(dá)下調(diào)，而功能是否受損仍需要進(jìn)一步研究。此外，體液免疫也參與了白癜風(fēng)發(fā)病，特異性抗體的檢查不僅能輔助診斷，還能有利于判斷疾病的活動(dòng)性和嚴(yán)重度。總之，免疫學(xué)機(jī)制是白癜風(fēng)發(fā)病的重要原因，針對(duì)各個(gè)環(huán)節(jié)開(kāi)展的治療方法，如調(diào)節(jié)異常的細(xì)胞因子水平、抑制淋巴細(xì)胞的激活等有助于疾病的治療。

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篇（2）

伴隨著科技的發(fā)展和醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展。從單一的免疫診斷技術(shù)發(fā)展為微量化、多基因和單細(xì)胞技術(shù)。而一些繼發(fā)性和原發(fā)性免疫缺陷及惡性腫瘤的臨床診斷，往往要求更加精確的免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)，還能對(duì)臨床治療的有效性進(jìn)行定量評(píng)價(jià)。

1免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的研究進(jìn)展

1.1熒光素標(biāo)記抗體技術(shù)

1.1.1流式細(xì)胞免疫熒光分析技術(shù)這是一種新型的血清試驗(yàn)方法，它是在免疫熒光基礎(chǔ)上建立起來(lái)的，對(duì)抗體利用熒光進(jìn)行染色，并在此基礎(chǔ)上對(duì)所需信息進(jìn)行獲取，進(jìn)而研制而成的流式細(xì)胞儀。其特征是擁有電子計(jì)算機(jī)技術(shù)和激光技術(shù)，主要是用于分析DNA含量，可在同一試管中，對(duì)多種靶物質(zhì)的潛在特征進(jìn)行檢測(cè)。目前這種技術(shù)盡管還沒(méi)有應(yīng)用于臨床上，但卻受到許多臨床檢驗(yàn)學(xué)者的關(guān)注。

1.1.2間接免疫熒光技術(shù)主要是檢測(cè)呼吸道病原體抗體、抗平滑肌抗體和抗病原體，可使自動(dòng)化程度和標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)提高，并使手工操作的誤差降低。這是一種相對(duì)成熟的技術(shù)，可用于商品的開(kāi)發(fā)。

1.2酶標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)

1.2.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)在檢測(cè)酶聯(lián)免疫技術(shù)上，從理論上分析，相應(yīng)的抗體或者是某一抗原純品都可以進(jìn)行應(yīng)用，所以在該技術(shù)的檢測(cè)上，抗體系統(tǒng)或者是可融性抗體都可以采納。這種技術(shù)是以免疫過(guò)氧化物為基礎(chǔ)，有較強(qiáng)的特異性、較高的敏感性，便于觀察、操作簡(jiǎn)單，已經(jīng)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，利于進(jìn)行大規(guī)模的檢查。

1.2.2酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)這是一種分析技術(shù)，應(yīng)用于對(duì)B細(xì)胞分泌免疫球蛋白的測(cè)定，是進(jìn)一步衍伸和發(fā)展了定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)。微孔內(nèi)進(jìn)入待檢測(cè)樣本后進(jìn)行培養(yǎng)，在特異性抗原的作用下，對(duì)B細(xì)胞或者是記憶型T細(xì)胞進(jìn)行活化，產(chǎn)生了IG或者是CK，清洗細(xì)胞之后，將第二抗體加入，IG或CK與抗體結(jié)合之后，在將酶生物素加入，發(fā)生反應(yīng)，而形成大小不一的圓形著色斑點(diǎn)。此技術(shù)即可用于各類CK的T細(xì)胞的分泌，還可用于抗體B細(xì)胞的分泌，這種技術(shù)也是檢測(cè)T細(xì)胞功能的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，其檢測(cè)靈敏度相當(dāng)高。

1.3新型標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)

1.3.1核酸標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)其原理是轉(zhuǎn)錄翻譯或者是擴(kuò)增核酸。在極短的時(shí)間內(nèi)，通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)，按照幾何數(shù)在擴(kuò)增，最終達(dá)到數(shù)百萬(wàn)倍，這就是擴(kuò)增。而轉(zhuǎn)錄翻譯是通過(guò)抗體DNA發(fā)生抗原反應(yīng)后，測(cè)定轉(zhuǎn)錄翻譯成的酶。靈敏性強(qiáng)是這兩種檢測(cè)方法的共同特征，目前，此種方法仍舊用于研究階段。

1.3.2量子點(diǎn)標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)在傳統(tǒng)的標(biāo)記免疫分析技術(shù)中，有較低的酶免疫分析靈敏度，同時(shí)有很大的污染存在于放射免疫分析中，而熒光免疫分析和發(fā)光免疫分析都有著較短的發(fā)光時(shí)間，很容易發(fā)生淬滅。而在20世紀(jì)70年代，科學(xué)家們就開(kāi)始廣泛關(guān)注良好的光電性能，并開(kāi)始初步應(yīng)用標(biāo)記免疫分析，其效果也非常令人滿意。量子由于有很小的尺寸，在受到刺激時(shí)，會(huì)發(fā)生熒光，所以它實(shí)際上是起到了探針的作用。在早期診斷疾病、細(xì)胞成像、測(cè)定生物多組分和免疫示蹤定位時(shí)，其應(yīng)用價(jià)值非常廣泛。

2其他免疫檢驗(yàn)技術(shù)

2.1微陣列免疫芯片技術(shù)這是一種小分子抗原分析平臺(tái)，具有高效的特征，是近年來(lái)剛剛出現(xiàn)的，它可以對(duì)復(fù)雜樣品中含量極低的目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行快速的定量檢測(cè)。同時(shí)，還可對(duì)生物樣品中全部蛋白質(zhì)含量的變化情況進(jìn)行檢測(cè)。其優(yōu)點(diǎn)是能夠進(jìn)行高通量的平行檢驗(yàn)與分析，可使樣本或藥品的用量降低。

2.2液態(tài)芯片技術(shù)是新一代生物芯片技術(shù)，在20世紀(jì)70年代美國(guó)Luminex公司研制，其檢測(cè)平臺(tái)是流式細(xì)胞技術(shù)，其載體是帶編碼的微球體，可用于大規(guī)模的測(cè)定蛋白質(zhì)和核酸。還可用于檢測(cè)多種指標(biāo)，包括傳染病、神經(jīng)―內(nèi)分泌等，可用于測(cè)試任何使用微量分析的系統(tǒng)。

3免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)

科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，要求能夠準(zhǔn)確分析從特定部位取得的微量樣本。隨著微納電子學(xué)及分子生物學(xué)的發(fā)展，在科研上免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)也有了質(zhì)的飛躍，在此趨勢(shì)下，將不斷應(yīng)用各種更為敏感的新的分析方法，使免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)朝著更新、更高的方向發(fā)展。

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篇（3）

中圖分類號(hào)：S852.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2013）11-0064-02

乳酸桿菌是革蘭氏陽(yáng)性菌，不形成芽孢，因能發(fā)酵乳酸而得名。乳酸桿菌不僅已廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)、食品加工業(yè)，隨著醫(yī)學(xué)研究的深入，在疾病治療和預(yù)防也得以應(yīng)用。肽聚糖是乳酸桿菌細(xì)胞壁的主要成分，真核細(xì)胞中不含肽聚糖，因此肽聚糖成了真核生物免疫系統(tǒng)識(shí)別的理想靶位。DNA是乳酸桿菌的遺傳物質(zhì)，對(duì)高等動(dòng)物免疫系統(tǒng)具有免疫刺激作用。菌體外膜蛋白（outer membrance protein，OMP）是乳酸桿菌細(xì)胞膜的一種外膜蛋白，OMP具有良好的免疫原性，不僅可刺激體液免疫，而且可以刺激細(xì)胞免疫作用。

1 乳酸桿菌

1.1 乳酸桿菌簡(jiǎn)介

乳酸桿菌是指能使糖類發(fā)酵產(chǎn)生乳酸的細(xì)菌，其存在廣泛，嗜酸性，最適合pH 5.5～6。在pH 3.0～4.5中仍然能生存，在無(wú)芽孢桿菌中其耐酸力最強(qiáng)。酸牛奶中有此菌，是一群生活在機(jī)體內(nèi)益于宿主健康的微生物，它維護(hù)人體健康和調(diào)節(jié)免疫功能的作用已被廣泛認(rèn)可。具有控制腸內(nèi)感染、抗腫瘤活性等，還能促進(jìn)小腸局部細(xì)胞免疫和體液免疫。

1.2 乳酸桿菌近期研究成果

國(guó)內(nèi)外有大量飼養(yǎng)和臨床試驗(yàn)證明乳酸桿菌對(duì)人和動(dòng)物都有保健和治療功效，乳酸桿菌活菌膠囊陰道置入對(duì)產(chǎn)婦局部微環(huán)境有調(diào)整作用，能有效改善產(chǎn)后女性陰道菌群失調(diào)狀態(tài)，使其接近正常女性陰道微環(huán)境[1]；在種蛋雞產(chǎn)蛋期飼糧中添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可以提高種蛋雞的產(chǎn)蛋率和對(duì)飼糧中粗蛋白的表觀消化率和改善免疫機(jī)能以及顯著提高乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量[2]；乳酸桿菌通過(guò)定制和提供免疫信號(hào)調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)[3]；Korshunov等[4]通過(guò)研究39例HPV感染伴CIN的婦女陰道分泌物情況，發(fā)現(xiàn)陰道內(nèi)乳酸桿菌的減少與宮頸癌前病變的發(fā)生密切相關(guān)，而且乳酸桿菌減少，各種條件致病菌增多，為HPV發(fā)揮作用提供了環(huán)境。

2 乳酸桿菌免疫

2.1 乳酸桿菌肽聚糖的免疫

2.1.1 乳酸桿菌肽聚糖 乳酸桿菌肽聚糖（peptidoglycan，PG）它是由雙糖單位、四肽尾還有肽橋聚合而成得多層網(wǎng)狀大分子結(jié)構(gòu)，N -乙酰葡萄糖胺（N-acetylglucosamine， NAG）和N-乙酰胞壁酸（N-acetylmuramic acid， NAMA）交替連接的雜多糖與不同組成的肽交叉連接形成的大分子。肽聚糖占細(xì)菌干重的50%～80%由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸通過(guò)β-1，4糖苷鍵連接而成，糖鏈間由肽鏈交聯(lián)，構(gòu)成穩(wěn)定的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

2.1.2 乳酸桿菌肽聚糖免疫增強(qiáng)作用 乳酸桿菌肽聚糖等免疫調(diào)節(jié)劑引起的免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)是大量蛋白共同作用的結(jié)果，孫進(jìn)等通過(guò)分析實(shí)驗(yàn)證實(shí)了乳酸桿菌肽聚糖引起了核糖體相關(guān)蛋白的明顯變化[5]。這種表現(xiàn)主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)個(gè)方面，首先，乳酸桿菌肽聚糖刺激后引起TH細(xì)胞激活，T細(xì)胞表面分子的表達(dá)被誘導(dǎo)，同時(shí)，第一信號(hào)系統(tǒng)和第二信號(hào)系統(tǒng)被激活。第二，特定炎性因子表達(dá)增強(qiáng)或減弱，及某些抗炎性因子表達(dá)上調(diào)[6]。

2.2 乳酸桿菌DNA的免疫

2.2.1 乳酸桿菌DNA 乳酸桿菌DNA是一條雙股環(huán)狀DNA分子組成，附著在橫隔中介體或細(xì)菌膜上。細(xì)菌染色體無(wú)組蛋白包繞。細(xì)菌染色體上的基因與真核細(xì)菌不同，無(wú)內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄后形成的mRNA不必再剪切、拼接，可直接翻譯成多肽。乳酸桿菌胞質(zhì)中還存在著一種小型環(huán)狀DNA分子-質(zhì)粒，質(zhì)粒能攜帶2～200個(gè)基因，可進(jìn)行自我復(fù)制。

2.2.2 乳酸桿菌DNA的免疫增強(qiáng)作用 乳酸桿菌DNA對(duì)免疫有增強(qiáng)作用，其原因可能與其他細(xì)菌DNA的作用相似，其免疫活性部位為非甲基化胞嘧啶鳥(niǎo)嘌呤二核苷酸（CPGdinucleotides）的特定結(jié)構(gòu)，即以CpG為核心，3'端緊接2個(gè)嘧啶，簡(jiǎn)寫(xiě)為5'-PuPuCpGpPyPy-3'。據(jù)報(bào)道，CpG-DNA可直接激活巨噬細(xì)胞分泌IL-12和TNF-α[7]。單核細(xì)胞受細(xì)菌DNA刺激后，IL-6、IL-12和TNF-α等細(xì)胞因子分泌增加，MHC-I與MHC-II類抗原表達(dá)增加，共刺激信號(hào)CD86與CD40表達(dá)增加，抗原提呈功能增強(qiáng)[8]。CpG-DNA還可延長(zhǎng)抗原提呈細(xì)胞的存活期，乳酸桿菌DNA可直接或間接地促進(jìn)NK細(xì)胞的功能。

2.3 乳酸桿菌OMP的免疫

2.3.1 乳酸桿菌OMP 乳酸桿菌外膜蛋白不是由跨生物膜的α螺旋組成，而是由反平行的β桶結(jié)構(gòu)組成，不同的外膜蛋白的β-桶由不同偶數(shù)個(gè)β-折疊片組成，從8個(gè)到22個(gè)不等。外膜鑲嵌蛋白有多種功能，例如細(xì)菌粘附、溶解和蛋白運(yùn)輸，以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。細(xì)菌的OMP通過(guò)抗吞噬、抗補(bǔ)體及抗血清殺菌作用而對(duì)細(xì)菌的致病過(guò)程起著非常重要的影響。

2.3.2 乳酸桿菌OMP的免疫增強(qiáng)作用 外膜蛋白可作用于參加免疫反應(yīng)的細(xì)胞，OMP 通過(guò)加強(qiáng)巨噬細(xì)胞對(duì)抗原的攝取，增強(qiáng)了淋巴細(xì)胞的活化，表現(xiàn)出在免疫反應(yīng)中的重要作用。用鼠傷寒桿菌OMP 50μg免疫小白鼠即可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗體并保護(hù)500 LD50細(xì)菌量的攻擊，同時(shí)OMP還可誘導(dǎo)產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)，表明OMP具有較強(qiáng)的免疫原性和細(xì)胞免疫能力。

3 乳酸桿菌的免疫學(xué)應(yīng)用前景

2株乳酸桿菌L.casei Zhang和MG-1的肽聚糖作為佐劑可明顯促進(jìn)新城疫油乳劑滅活疫苗和禽流感（H5）亞型油乳劑滅活疫苗對(duì)雛雞的免疫效果，并隨著肽聚糖添加量的增加抗體滴度也增加[9]。乳酸桿菌L.casei Zhang DNA作為佐劑可明顯促進(jìn)新城疫油苗和禽流感（H5）亞型油苗對(duì)雞的免疫效果，增強(qiáng)雞的細(xì)胞與體液免疫應(yīng)答[10]。乳酸桿菌菌體OMP具有良好的免疫原性可刺激體液免疫和細(xì)胞免疫作用，顯著提高了新城疫疫苗的免疫效果和抵抗相應(yīng)強(qiáng)毒的攻擊[11]。

乳酸桿菌在免疫學(xué)方面的開(kāi)發(fā)有非常中的作用，對(duì)家禽的疫苗免疫增強(qiáng)作用已得到證實(shí)，對(duì)蛋雞和肉種雞的健康成長(zhǎng)有重要作用，乳酸桿菌的三類免疫增強(qiáng)劑可在禽類傳染病防治中進(jìn)一步加以推廣，對(duì)其他動(dòng)物免疫增強(qiáng)劑也提供了可以研究及應(yīng)用的前景。

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篇（4）

乙型肝炎(HB)是一種世界范圍內(nèi)流行的傳染病。據(jù)估計(jì)，全球約20億人曾經(jīng)感染HB病毒(HBV)，慢性感染者約有3.5～4億人，每年有100萬(wàn)人死于HBV所致的肝硬化、肝衰竭及原發(fā)性肝癌〔1〕。我國(guó)為HB高發(fā)國(guó)家，人群HBV感染率約為9.09%〔2〕，HB已成為嚴(yán)重的社會(huì)問(wèn)題。HBV感染和機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)，兒童期HBV感染，約90%發(fā)展成為慢性感染，而青少年及成年期感染，僅有10%發(fā)展成慢性感染。隨著年齡老化，手術(shù)及輸血的機(jī)會(huì)增多，以及老年人臟器特有的變化，導(dǎo)致老年人慢性HBV感染機(jī)會(huì)明顯增加。

1 HBV的特點(diǎn)

HBV屬于嗜肝DNA病毒，其完整的病毒顆粒成為Dane顆粒，直徑42 nm，由雙層外殼和一個(gè)核心組成。核心直徑為27 nm，內(nèi)含環(huán)狀雙股DNA，DNA聚合酶、核心蛋白〔3〕。外部為包膜蛋白，厚約7 nm，即表面抗原。其基因組由S區(qū)、C區(qū)、X區(qū)和P區(qū)組成。S區(qū)編碼前S1蛋白、前S2蛋白及乙肝病毒表面抗原(HBsAg)。前S蛋白有很強(qiáng)的免疫原性。在HBV的附著和侵入宿主肝細(xì)胞的機(jī)制中起著重要的作用。前S1和前S2蛋白可引出和調(diào)節(jié)宿主的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，對(duì)于清除體液內(nèi)的病毒和阻止病毒感染健康的肝細(xì)胞提供重要的免疫防御機(jī)制。C區(qū)由前C基因和C基因組成，前C基因編碼的蛋白質(zhì)經(jīng)加工后分泌到細(xì)胞外形成乙肝病毒e抗原(HBeAg)，C基因編碼的蛋白質(zhì)為HBcAg。目前認(rèn)為HBcAg是宿主Tc(細(xì)胞毒T細(xì)胞)作用的主要靶抗原。P區(qū)是最長(zhǎng)的開(kāi)放性讀碼框，編碼多種功能性蛋白，包括逆轉(zhuǎn)錄酶/DNA聚合酶、RNA酶等，參與HBV的復(fù)制。X基因編碼X蛋白，可激活多種調(diào)控基因，與原發(fā)性肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。

2 HBV感染的免疫學(xué)機(jī)制

一般認(rèn)為HBV不直接損害肝細(xì)胞，而是通過(guò)宿主的免疫應(yīng)答和反應(yīng)引起肝細(xì)胞的損傷和破壞。宿主免疫反應(yīng)的不同，直接影響HBV感染所致的轉(zhuǎn)歸。HBV感染后，機(jī)體清除HBV的機(jī)制主要包括特異性體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，以及非特異性免疫反應(yīng)。

2.1 急性HB的免疫機(jī)制 HBV感染肝細(xì)胞后，病毒抗原被抗原提呈細(xì)胞(APC)的蛋白酶體裂解成小分子的寡肽，并與肝細(xì)胞內(nèi)人類白細(xì)胞抗原(HLAI)類分子結(jié)合成復(fù)合物，表達(dá)于細(xì)胞表面，成為T(mén)細(xì)胞表位。CTL通過(guò)表面的CD8+分子與HLAI類分子產(chǎn)生黏附，并由TCR識(shí)別上述寡肽表位，此類CTL即為HBV抗原特異性CTL(HBV antigens Specific cytotoxic lymphocytes，HBVsCTL)。HBV特異性的CTL通過(guò)分泌大量的γ干擾素(IFNγ)等細(xì)胞因子達(dá)到清除病毒的作用。在自限性急性乙型肝炎患者中，特異性CTL應(yīng)答作用強(qiáng)，可能與病毒被迅速清除而肝細(xì)胞損傷較輕有關(guān)，而在老年患者中，胸腺老齡退化，T細(xì)胞活性下降，其亞群分布發(fā)生改變，導(dǎo)致CTL活性和殺傷力明顯下降，導(dǎo)致肝炎慢性化〔4〕。

2.2 HBV感染慢性化的免疫機(jī)制

2.2.1 天然免疫 樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells， DCs)，是至今發(fā)現(xiàn)的功能最為強(qiáng)大的專職APC，是機(jī)體對(duì)異己抗原發(fā)生免疫應(yīng)答的首要環(huán)節(jié)〔5〕。根據(jù)其細(xì)胞表面的標(biāo)志可分為髓樣樹(shù)突狀細(xì)胞(myeloid dendritic cell，mDC)和漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cell，pDC)。pDC在宿主對(duì)病毒的防御機(jī)制中起到重要的作用，并具有大量分泌Ⅰ型干擾素的能力。DCs既是天然免疫的重要組成部分，可通過(guò)Toll樣受體(Toll like receptor，TLR)識(shí)別病原相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular pattern，PAMP)而觸發(fā)，分泌IFN、白介素(IL)等細(xì)胞因子，促進(jìn)DCs自身成熟的同時(shí)，對(duì)病原體進(jìn)行原始?xì)?〕。同時(shí)，DCs也是連接天然免疫和獲得性免疫的橋梁。成熟的DC表面高表達(dá)HLADR，CD86(B71)，CD80(B72)等共刺激分子，可高效激活未致敏T淋巴細(xì)胞，發(fā)揮特異性細(xì)胞免疫〔7〕。因此，DC的功能狀態(tài)、表達(dá)的TLR對(duì)機(jī)體天然免疫以及獲得性免疫起到關(guān)鍵作用。大量研究表明，老年慢性乙型病毒性肝炎患者外周血DCs存在表型缺陷，成熟障礙，功能下調(diào)〔8〕，不能有效將外來(lái)抗原有效遞呈給T淋巴細(xì)胞，而致不能及時(shí)有效啟動(dòng)特異性免疫，清除HBV，最終導(dǎo)致HBV感染持續(xù)化。

Toll受體為Ⅰ型跨膜糖蛋白，識(shí)別特異性高度保守分子，可以表達(dá)在胞膜及胞內(nèi)，已知人的TLR受體有11種。其中TLR 2、4、5表達(dá)在細(xì)胞表面，TLR3、7、8表達(dá)在內(nèi)涵體和溶酶體膜，TLR9表達(dá)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，活化后進(jìn)入內(nèi)涵體和溶酶體〔9〕。其中TLR 3、7、8、9參與了抗病毒的天然免疫反應(yīng)〔10，11〕它在天然免疫中通過(guò)對(duì)病源分子相關(guān)模式(PAMP)的識(shí)別發(fā)揮作用，通過(guò)刺激信號(hào)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞因子的產(chǎn)生和協(xié)同刺激因子的表達(dá)，在天然免疫和獲得性免疫中起到了橋梁的作用。大量的研究顯示HBV和天然免疫系統(tǒng)之間存在相互的作用，HBV可干擾Toll樣受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制細(xì)胞因子IL10、IFNγ、TNFα的產(chǎn)生，HBV還可引起MD1效應(yīng)分子的表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而引起TLR 4的表達(dá)下調(diào)，間接抑制TLR為媒介的免疫機(jī)制〔12〕，從而引起感染的持續(xù)化。

2.2.2 獲得性免疫 HBV感染機(jī)體后，除了早期建立起來(lái)的非特異性免疫應(yīng)答外，還有特異性免疫應(yīng)答，而后者更為重要。特異性免疫應(yīng)答主要包括體液反應(yīng)和細(xì)胞反應(yīng)。體液免疫中的特異性抗體主要作用是中和循環(huán)內(nèi)的病毒并阻止病毒感染健康的肝細(xì)胞，老年人B 細(xì)胞的成熟過(guò)程明顯減慢，其成熟周期延長(zhǎng)，B 細(xì)胞各亞型的活力不同程度地下降，其周轉(zhuǎn)率也呈不同程度的減退;B 細(xì)胞表面免疫球蛋白(Ig)濃度降低，產(chǎn)生抗體活力亦隨增齡而下降，免疫應(yīng)答亦降低〔13〕。細(xì)胞免疫反應(yīng)包括抗原特異的細(xì)胞毒懷淋巴細(xì)胞(TCL)，自然殺傷細(xì)胞(NK)，抗體依賴的細(xì)胞毒細(xì)胞(ADCC)和淋巴因子激活的K細(xì)胞(LAK)等，其中以CTL最為重要〔14，15〕。

HBV特異性細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞(CTL)，通過(guò)T細(xì)胞受體(TCR)識(shí)別APC(病毒感染的肝細(xì)胞，吞噬病毒抗原的樹(shù)突狀細(xì)胞等)表面的主要組織相容性復(fù)合體(Major histocompatibility complex MHC)Ⅰ類分子結(jié)合活化，活化的主要通過(guò)以下兩個(gè)途徑發(fā)揮作用①溶胞途徑:機(jī)體針對(duì)HBV編碼產(chǎn)物所產(chǎn)生的特異性T淋巴細(xì)胞，借助其分泌的穿孔素、顆粒酶及其表面表達(dá)的Fas配體等使病毒感染的靶細(xì)胞凋亡。②非溶胞途徑:機(jī)體針對(duì)HBV編碼產(chǎn)物所產(chǎn)生的特異性T淋巴細(xì)胞通過(guò)分泌特定的細(xì)胞因子如IFNγ和TNFα來(lái)抑制HBV的復(fù)制繼而達(dá)到清除病毒的作用〔16〕。CD4+T淋巴細(xì)胞的主要作用是輔助B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體及誘導(dǎo)CTL活化，同時(shí)也能增強(qiáng)樹(shù)突狀細(xì)胞的活化CD8+效應(yīng)T細(xì)胞的過(guò)程，從而清除病毒〔17〕。老年人因胸腺萎縮等原因表現(xiàn)免疫功能低下，而胸腺是主要的免疫器官，是T淋巴細(xì)胞成熟分化的場(chǎng)所，在老年慢性乙肝患者中，雖然T細(xì)胞的總數(shù)沒(méi)有發(fā)生明顯的變化，但是其增殖力及活性隨著胸腺的退化而逐漸下降，亞群分布發(fā)生變化，CTL活性及殺傷力受損，引起感染慢性化〔18〕。

3 老年慢性乙型肝炎的特點(diǎn)

HBV感染后慢性化的機(jī)制，除了特異性免疫應(yīng)答因素外，尚有許多其他的因素，病毒因素包括病毒的基因型、突變等宿主因素包括宿主的年齡、性別、人白細(xì)胞抗原基因型和免疫應(yīng)答等方面。

3.1 免疫系統(tǒng)退化 60歲以上老年人胸腺組織已不易測(cè)到。因此，細(xì)胞免疫功能顯著受損，淋巴細(xì)胞功能受損，B 淋巴細(xì)胞功能也隨之下降，致使體液免疫功能發(fā)生改變。另外，老年人血清免疫球蛋白IgA及l(fā)gG值增加，IgA增高更顯著，而IgM濃度下降，多數(shù)老年人血清中有自身抗體。這也反映老年人免疫系統(tǒng)失調(diào)。

3.2 病毒的變異 隨著HBV感染時(shí)間的延長(zhǎng)，自身的不斷復(fù)制，以及宿主的免疫壓力、外環(huán)境和藥物的作用下，病毒會(huì)形成變異，從而對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生新的影響。其中比較常見(jiàn)的是前C區(qū)1896位點(diǎn)的變異，前C基因變異可能影響到抗原的加工、提呈，變異的抗原與HLA形成的復(fù)合物發(fā)生構(gòu)型變化，從而使CD4+T細(xì)胞失去了對(duì)復(fù)制病毒的特異性的識(shí)別能力，同時(shí)也影響CTL對(duì)病毒的識(shí)別，致使T細(xì)胞免疫作用下降。Bertoletti等〔19〕研究發(fā)現(xiàn)野生型病毒前C基因表達(dá)的產(chǎn)物可引起HLAA2限制性CTL發(fā)生反應(yīng)，而突變株病毒無(wú)此作用，說(shuō)明特異性CTL對(duì)變異病毒的抗原喪失了反應(yīng)能力，從而導(dǎo)致宿主免疫功能低下。Tur等〔20〕也發(fā)現(xiàn)HBeAg的缺失易導(dǎo)致宿主免疫功能紊亂。慢性乙型肝炎病毒感染者前C區(qū)位點(diǎn)突變，常伴有較高水平HBVDNA復(fù)制效率，存在更嚴(yán)重的免疫紊亂，HBeAg的表達(dá)是影響宿主外周血T細(xì)胞亞群變化的一個(gè)重要因素。

4 總 結(jié)

HBV感染機(jī)體后，首先由APCs等吞噬細(xì)胞捕獲異己抗原，啟動(dòng)天然免疫屏障，發(fā)揮非特異性的免疫應(yīng)答，起到初步清除病原體的目的。繼之通過(guò)一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，把異己抗原信號(hào)呈遞給淋巴細(xì)胞，啟動(dòng)適應(yīng)性免疫，活化的CTL通過(guò)兩條途徑清除病毒即胞溶途徑分泌穿孔素、顆粒酶等細(xì)胞毒分子直接殺傷病毒感染的靶細(xì)胞或者途徑介導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡和非胞溶途徑分泌細(xì)胞因子抑制病毒復(fù)制。而老年人胸腺老齡化退化，各種免疫細(xì)胞的活性明顯下降，機(jī)體免疫功能低下，免疫應(yīng)答能力下降，其抗原提呈功能及細(xì)胞免疫功能明顯下降，導(dǎo)致病毒感染的肝細(xì)胞持續(xù)發(fā)生損害，清除病毒抗原的作用明顯減弱，成為疾病的慢性化的主要因素。除上述因素外，老年人肝臟重量減輕，肝細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞器數(shù)明顯減少，也參與疾病慢性化的過(guò)程中。因此，對(duì)于老年HB的免疫學(xué)的研究，對(duì)其治療及預(yù)后有重要意義。

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篇（5）

小兒哮喘是一種表現(xiàn)反復(fù)發(fā)作性咳嗽，喘鳴和呼吸困難，并伴有氣道高反應(yīng)性的可逆性、梗阻性呼吸道疾病，會(huì)嚴(yán)重危害兒童的身體健康，異常免疫反應(yīng)在發(fā)病中起著重要作用，其主要病理過(guò)程為氣道黏膜水腫，嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)氣道，導(dǎo)致內(nèi)分泌物增多[1-2]。由于氣道有炎癥，使氣道高反應(yīng)性，細(xì)小支氣管管腔狹窄甚至閉塞，血清和氣道分泌物中總免疫球蛋白（IgE）和過(guò)敏原特異性IgE增高，該病理和病理生理改變的本質(zhì)是異常的免疫反應(yīng)。

1、遺傳學(xué)背景

哮喘為多基因遺傳病：其遺傳度高達(dá)77%，但環(huán)境因素僅占23%。通過(guò)結(jié)合DNA芯片技術(shù)與臨床表型關(guān)聯(lián)的分析得出：哮喘候選基因的篩選已被越來(lái)越多的人所關(guān)注。目前已發(fā)現(xiàn)11q與過(guò)敏體質(zhì)（atopy）有關(guān)，其控制總IgE和氣道高反應(yīng)性的基因位點(diǎn)位于染色體5q31成簇的細(xì)胞因子（IL-4，IL-13和IL-4受體）中。這些基因的突變導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信息傳遞因子信息傳感和轉(zhuǎn)化活化劑-6（STAT6）活化[4]，促使atopy和哮喘的發(fā)生。而且β2受體的突變與哮喘有緊密的關(guān)系，位于14q的T細(xì)胞抗原受體（TCR）和特異性IgE反應(yīng)連鎖。由此可見(jiàn)，哮喘的發(fā)病和atopy的形成均具有遺傳背景.。然而近幾十年，哮喘的發(fā)病率卻在成倍的上升，這說(shuō)明不僅僅是候選基因發(fā)生突變而導(dǎo)致的，主要原因是環(huán)境因素變化。此外，從已知的哮喘候選基因來(lái)看，均屬免疫因子的基因位點(diǎn)，這些基因多態(tài)性的表型（臨床表現(xiàn)）必然關(guān)系到免疫學(xué)改變[3]。

2、TH1/TH2 細(xì)胞功能失調(diào)

TH1 細(xì)胞的主要通過(guò)分泌IL-2和IFN- γ等細(xì)胞因子對(duì)抗細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌及原蟲(chóng)的免疫反應(yīng)，對(duì)誘發(fā)器官特異性自身免疫病、器官移植排斥反應(yīng)以及抗感染色疫中起面議調(diào)節(jié)作用，而TH2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13，能夠在誘發(fā)過(guò)敏反應(yīng)中調(diào)節(jié)體液免疫反應(yīng)，并輔助B細(xì)胞合成轉(zhuǎn)化免疫球蛋白，其中，分泌出的IL-4能夠促進(jìn)IgE的合成，IL-5和IL-8能夠延長(zhǎng)嗜酸性粒細(xì)胞在氣道內(nèi)的存活時(shí)間，所以，形成過(guò)敏體質(zhì)的基礎(chǔ)便是TH2的功能亢進(jìn)[4]。

在一般情況下，TH1/ TH2細(xì)胞處于恒定狀態(tài)，二者功能發(fā)生變化時(shí)又會(huì)產(chǎn)生相互影響，例如當(dāng)哮喘患者TH1細(xì)胞功能下降時(shí)，TH2細(xì)胞的功能就反而增大，導(dǎo)致生成大量炎癥因子，IFN- γ水平降低，IL-4、IL-5水平升高，說(shuō)明患者體內(nèi)TH1/ TH2功能失調(diào)，當(dāng)然，TH1細(xì)胞和TH2細(xì)胞的功能并不是相互獨(dú)立的，TH1/ TH2細(xì)胞起著相互抑制的作用，當(dāng)TH1內(nèi)的細(xì)胞因子IFN- γ拮抗TH2的IL-4和IL-10時(shí)，會(huì)導(dǎo)致TH2細(xì)胞的活性減弱，相反，當(dāng)TH2細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子IL-4和IL-10拮抗IL-2和IFN- γ時(shí)，TH1細(xì)胞的活性就會(huì)減弱。總免疫球蛋白會(huì)促進(jìn)肥大細(xì)胞和嗜酸粒形細(xì)胞分化，進(jìn)而形成以IgE為特征的速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，即遲發(fā)型哮喘反應(yīng)。

從最近的小兒哮喘發(fā)病機(jī)制的研究結(jié)果：諸多哮喘患兒的體內(nèi)并不存在TH1細(xì)胞功能低下或者TH2細(xì)胞功能亢進(jìn)的現(xiàn)象，由此表明，TH1/ TH2細(xì)胞失衡并不是導(dǎo)致小兒哮喘發(fā)病的唯一因素，還尚有其他亟待可知的機(jī)制參與。

3、TH2細(xì)胞引起免疫反應(yīng)

1、嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil） 嗜酸性粒細(xì)胞屬于白細(xì)胞，其具有粗大的嗜酸性顆粒，內(nèi)含有過(guò)氧化物酶和酸性磷酸酶，氣道全層會(huì)在TH2細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子IL-5和 IL-13的誘導(dǎo)下聚集大量嗜酸性粒細(xì)胞，從而釋放出炎癥介質(zhì)，主要有嗜酸細(xì)胞神經(jīng)毒蛋白、膠原酶、NO、以及血小板激活因子等。

2、免疫球蛋白（IgE） IgE是人體的一種抗體，存在于血中，可以引起I型超敏反應(yīng)，TH2細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子IL-4能夠促成lgE的合成，它與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞結(jié)合釋放出炎性介質(zhì)，從而產(chǎn)生免疫功能。

3、細(xì)胞黏附分子（CAM） 細(xì)胞黏附分子能夠通過(guò)介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞及其他氣道結(jié)構(gòu)細(xì)胞的相互作用來(lái)調(diào)控白細(xì)胞在局部的聚集與歸巢等活動(dòng)[2]，由于TH2內(nèi)細(xì)胞因子IL-6以及腫瘤壞死因子的刺激，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞大量在氣道聚集。同時(shí)，血管細(xì)胞黏附因子、細(xì)胞間黏附分子、分泌因子都會(huì)到氣道參與聚集。

4、趨化因子（chemokines） 趨化因子在炎癥反應(yīng)中有著不可替代的作用，它能夠吸引白細(xì)胞移行到感染部位的一些低分子量趨化因子（多為8-10KD），同樣，嗜酸細(xì)胞活化趨化因子也會(huì)參與到炎癥細(xì)胞在氣道聚集。

5、內(nèi)皮素（Ets） 內(nèi)皮素存在于血管內(nèi)皮以及各種組織和細(xì)胞中，是調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子，能夠維持基礎(chǔ)血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)。其合成主要取決于巨噬細(xì)胞原炎癥因子和腫瘤壞死因子-α的調(diào)控。內(nèi)皮素不僅能夠有效收縮支氣管平滑肌，而且還能促進(jìn)黏膜下腺體的分泌以及促使平滑肌合成纖維細(xì)胞的增殖。

4、樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）

樹(shù)突狀細(xì)胞是機(jī)體功能最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞，能高效地?cái)z取、處理和遞呈抗原，自身有很強(qiáng)的免疫刺激能力，對(duì)小兒哮喘的發(fā)病機(jī)制起著至關(guān)重要的作用。其通常少量分布于與外部接觸的皮膚部位，DC主要分為髓樣DC（DCl）和淋巴樣DC（DC2），DCl分泌的IL-12和IL-18促使TH0細(xì)胞分化為T(mén)H1細(xì)胞，由于IL-4的刺激，TH0漸漸向TH2發(fā)育，同時(shí)IFN- γ的正反饋刺激DCl 使TH1分泌更多的IL-12，因而導(dǎo)致DCl功能不足，TH1/ TH2細(xì)胞功能失衡，很大程度上，會(huì)引起人的過(guò)敏反應(yīng)[5]。

DC有成熟狀態(tài)和未成熟狀態(tài)，在人體內(nèi)， DC大部分是非成熟狀態(tài)，未成熟DC有極強(qiáng)的抗原吞噬能力，在攝取抗原或受到外界因素刺激時(shí)就會(huì)分化為成熟DC，而成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞，近年來(lái)，人們?cè)絹?lái)越重視微環(huán)境因素對(duì)不成熟DC發(fā)育可能造成的影響，比如細(xì)胞因子。

最近研究表明又出現(xiàn)了低3種表型的DC[6]，即低分化DC，其吞噬功能很強(qiáng)，但分泌細(xì)胞因子的能力較弱，它與DC1、DC2不同的是，在提呈抗原的過(guò)程中并不會(huì)激活TH0細(xì)胞。由此看出，樹(shù)突狀細(xì)胞對(duì)小兒哮喘的發(fā)病具有關(guān)鍵作用。

5、免疫耐受現(xiàn)象

免疫耐受是指免疫活性細(xì)胞接觸抗原性物質(zhì)時(shí)所表現(xiàn)的一種特異性的無(wú)應(yīng)答狀態(tài)，如在抗原或過(guò)敏原刺激下，樹(shù)突狀細(xì)胞內(nèi)不成熟的DC能夠抑制氣道炎癥反應(yīng)。但準(zhǔn)確機(jī)制尚不明，導(dǎo)致不成熟DC誘導(dǎo)T細(xì)胞的無(wú)能化，可能是由于它們之間缺少共刺激分子。

6、哮喘的發(fā)作與因素

哮喘發(fā)作的前兆便是出現(xiàn)過(guò)敏體質(zhì)，與TH2細(xì)胞不同，T細(xì)胞主要產(chǎn)生IL-10來(lái)抑制TH1細(xì)胞和TH2細(xì)胞，而TH3細(xì)胞主要分泌TGF-β來(lái)抑制炎癥的反應(yīng)，通過(guò)誘導(dǎo)共刺激分子，T細(xì)胞、TH3細(xì)胞由于與其配體的相互連接而被活化 ，從而導(dǎo)致細(xì)胞功能缺乏，免疫耐受狀態(tài)被破壞，便出現(xiàn)了過(guò)敏體質(zhì)。

由于近年來(lái)哮喘發(fā)病率急速上升[7]，隨之便出現(xiàn)了各種導(dǎo)致因素，感染便是其中之一，感染的抗哮喘機(jī)制是極其復(fù)雜的，通過(guò)toll樣受體細(xì)菌會(huì)促使TH1的發(fā)育，由于缺乏經(jīng)常性呼吸道感染的原因，導(dǎo)致TH1不能完全發(fā)育，使新生兒時(shí)期，TH2細(xì)胞的功能亢進(jìn)發(fā)展迅速，便形成了過(guò)敏體質(zhì)。已有醫(yī)學(xué)證明鼻病毒、腺病毒、衣原體或支原體呼吸道感染也會(huì)導(dǎo)致哮喘的發(fā)作，但是也并不是所有的呼吸道感染都能誘發(fā)哮喘的發(fā)作。是否導(dǎo)致哮喘的發(fā)作取決于病原體的抗原成分，成分不同，可能誘發(fā)哮喘也可能抗哮喘，哮喘的發(fā)作與感染機(jī)會(huì)并沒(méi)有直接的關(guān)系。

7、哮喘的免疫學(xué)治療

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷更新，目前已研究出許多控制哮喘發(fā)作的方法，如氣道吸入糖皮質(zhì)激素、抗原特異性免疫療法以及LgE單克隆抗體治療等療法，但這些并不能從根本上治療哮喘，，如糖皮質(zhì)激素，它只能控制哮喘癥狀，必須持續(xù)用藥來(lái)預(yù)防復(fù)發(fā)。所以深入研哮喘發(fā)病機(jī)制探索出一種新的能夠抑制哮喘的發(fā)作的療法是有意義的。

由于哮喘發(fā)作的機(jī)制是免疫耐受被打破，所以想要研究出預(yù)防和治療哮喘的有效方法就需重建免疫耐受，增強(qiáng)免疫耐受的方法如下：

7.1益生態(tài)學(xué)治療：為激活黏膜免疫系統(tǒng)NOD2的活性來(lái)預(yù)防過(guò)敏性疾病的發(fā)生，可口服乳酸桿菌。

7.2抗原特異性免疫治療：通過(guò)反復(fù)接觸少量過(guò)敏原來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答，使機(jī)體產(chǎn)生耐受性，當(dāng)機(jī)體再次接觸過(guò)敏原時(shí)，便可減少介質(zhì)釋放，減輕氣道炎癥，從而降低氣道反應(yīng)性。

7.3脫敏治療：脫敏治療有口服過(guò)敏原和皮下注射過(guò)敏原，為提高其特異性免疫耐受，可通過(guò)誘導(dǎo)IL-10來(lái)抑制IL-4的產(chǎn)生。皮下注射過(guò)敏原已廣泛應(yīng)用于小兒哮喘的臨床。

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篇（6）

【關(guān)鍵詞】 中西醫(yī)結(jié)合 抗腫瘤 免疫學(xué)

在眾多的對(duì)腫瘤治療方法的探索中，各種治療方式的結(jié)果大多不如預(yù)期有效［1］，而傳統(tǒng)的化療藥具有明顯的毒副作用及耐藥性，從天然產(chǎn)物中提取可以用于臨床的有效成分激發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)的活性一直是多年來(lái)學(xué)術(shù)界感興趣的重要研究課題。我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)不但具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，而且與西醫(yī)相比，中醫(yī)更重視整體認(rèn)識(shí)疾病發(fā)生的條件，強(qiáng)調(diào)“治未病”。中醫(yī)認(rèn)識(shí)到正虛是疾病的重要內(nèi)因，即所謂“邪之所湊，其氣必虛”。正虛學(xué)說(shuō)已被現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識(shí)和承認(rèn)。西醫(yī)比較能融合現(xiàn)代科學(xué)成就，認(rèn)識(shí)病癥具體、深入。越來(lái)越多的意向認(rèn)為中西醫(yī)應(yīng)當(dāng)互相補(bǔ)充，但如何互相補(bǔ)充又是擺在人們面前的一個(gè)迫切需要解決的難題。我們認(rèn)為，這種結(jié)合或補(bǔ)充，不但在于臨床實(shí)踐中的摸索，而且還應(yīng)同時(shí)解決理論上的問(wèn)題，只有這樣才能被國(guó)際醫(yī)學(xué)界認(rèn)可。現(xiàn)將中西醫(yī)結(jié)合抗腫瘤的免疫學(xué)機(jī)制研究綜述如下。

1 對(duì)非特異性免疫抗腫瘤的影響

機(jī)體免疫機(jī)能狀態(tài)的異常及腫瘤免疫逃逸是腫瘤發(fā)生的重要原因，同時(shí)腫瘤細(xì)胞及其產(chǎn)生的腫瘤性免疫抑制因子往往導(dǎo)致荷瘤機(jī)體免疫機(jī)能低下，由于腫瘤細(xì)胞抗原性較弱或抗原調(diào)變等因素導(dǎo)致腫瘤特異性免疫往往難以奏效，因此非特異性免疫在機(jī)體抗腫瘤免疫方面發(fā)揮著重要作用。機(jī)體的非特異性免疫包括單核巨噬細(xì)胞及NK細(xì)胞所構(gòu)成的機(jī)體腫瘤免疫監(jiān)視中的第一道防線。

1.1 中西醫(yī)聯(lián)合對(duì)巨噬細(xì)胞抗腫瘤的影響欖香烯是從姜科植物溫郁金中提取的抗癌有效成分。將其用專利方法制備出Hca-F欖香烯復(fù)合瘤苗HSP70（HSP70HTCV），分析其對(duì)小鼠腹腔或脾臟巨噬細(xì)胞功能的影響及抗免疫作用的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)HSP70HTCV免疫小鼠脾臟巨噬細(xì)胞分泌TNF的能力高于HSP70BCG免疫小鼠的脾臟巨噬細(xì)胞，且巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力亦明顯增強(qiáng)，由此得出結(jié)論［2］，HSP70HTCV免疫誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞有更強(qiáng)的殺傷活性。

1.2 中西醫(yī)聯(lián)合對(duì)NK細(xì)胞抗腫瘤的影響艾迪注射液聯(lián)合化療藥物環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春新堿、阿霉素等對(duì)惡性淋巴瘤進(jìn)行的臨床治療研究中，兩個(gè)療程后，治療組NK細(xì)胞活性明顯高于對(duì)照組，能夠提高化療的耐受性，治療后KPS有明顯地提高，對(duì)肝腎功能、骨髓功能無(wú)明顯影響［3］。艾迪注射液是由人參、黃芪、刺五加、斑蝥等組成，主要含有人參皂苷、黃芪皂苷、黃芪多糖、刺五加多糖及去甲斑蝥素。研究者認(rèn)為此藥可作為臨床抗腫瘤治療的輔助藥物。那么，分析其藥物成分，再結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)人參、黃芪、刺五加免疫學(xué)機(jī)制抗腫瘤作用的研究中均得到肯定的結(jié)果［4~9］，如研究顯示人參皂苷Rg1和Rh1均可不同程度地增強(qiáng)正常人外周血DC刺激T細(xì)胞的增殖及LPAK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，推測(cè)Rg1和Rh1可能促進(jìn)DC合成分泌IL-2和IL-12并提高DC表面共刺激分子的表達(dá)，從而增強(qiáng)DC的抗原遞呈能力［6］；而斑蝥有抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，經(jīng)去甲基處理的斑蝥素在保持其原有療效的同時(shí)，可促進(jìn)骨髓造血干細(xì)胞向粒－單核細(xì)胞分化而使白細(xì)胞增加［10］。當(dāng)然，中藥復(fù)方制劑的分析是不能僅以每一成分的作用進(jìn)行簡(jiǎn)單的疊加的。另外，艾迪注射液抗瘤作用的免疫學(xué)機(jī)理也是多方面的［11］，同時(shí)諸如艾迪注射液與化療藥物聯(lián)合這樣通過(guò)增強(qiáng)NK細(xì)胞活性發(fā)揮抗癌作用的藥物也還有香菇多糖［12］、益肺顆粒［13］等。

2 對(duì)特異性免疫抗腫瘤的影響

機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答包括細(xì)胞和體液免疫，兩者相互協(xié)作共同殺傷腫瘤細(xì)胞，但以細(xì)胞免疫為主。

2.1 對(duì)細(xì)胞免疫的影響參與抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要有T細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞以及前文中所提及的對(duì)特異性細(xì)胞免疫起重要調(diào)節(jié)作用的NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等。

2.1.1 對(duì)T細(xì)胞的作用

αβT細(xì)胞：αβT細(xì)胞包括MHC I類分子限制的CD8+CTL細(xì)胞和MHC Ⅱ類分子限制的CD4+輔T細(xì)胞，兩者活化都需要雙信號(hào)刺激。第一信號(hào)是抗原刺激信號(hào)，指從腫瘤細(xì)胞脫落下的腫瘤抗原，經(jīng)APC攝取，加工成抗原多肽，并與細(xì)胞表面MHC Ⅱ類分子結(jié)合遞呈給CD4+ TH細(xì)胞。在腫瘤細(xì)胞合成的腫瘤肽，與MHC I類分子結(jié)合后共同表達(dá)于細(xì)胞表面，而被CD8+ CTL細(xì)胞識(shí)別。黃芪注射液聯(lián)合MHC I類限制性腫瘤抗原多肽Mut1致敏的樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）對(duì)肺癌小鼠的治療作用及免疫學(xué)原理的研究中，發(fā)現(xiàn)以腫瘤抗原多肽致敏的DC與黃芪注射液聯(lián)合治療能更有效的促進(jìn)荷瘤宿主的免疫應(yīng)答，具有顯著的體內(nèi)抑制肺癌轉(zhuǎn)移的效果［14］。再說(shuō)第二類信號(hào)，即協(xié)同刺激信號(hào)，T細(xì)胞除通過(guò)TCR與Ag-MHC分子復(fù)合體接受抗原信號(hào)外，還要通過(guò)APC或腫瘤細(xì)胞表面協(xié)同刺激信號(hào)，才能使T細(xì)胞有效地活化。活化的CD4+T細(xì)胞可產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，促進(jìn)CD8+T細(xì)胞活化，激活巨噬細(xì)胞，參與抗腫瘤作用。放化療法配合艾灸神闕穴治療晚期鼻咽癌就有一定的抗腫瘤和抗放化療損傷作用［15］，還有如百合固金湯口服聯(lián)合利君派舒靜脈滴注治療肺癌［16］，治療組 IL-2，CD3， CD4， CD4/CD8均明顯上升，與治療前比較，差異有非常顯著性意義 (P＜ 0.01)。

γδT細(xì)胞：γδT細(xì)胞分化發(fā)展早于αβT細(xì)胞，多分布在全身各處上皮組織內(nèi)，所發(fā)揮的細(xì)胞毒作用可能不受經(jīng)典MHC分子限制，且能殺傷對(duì)NK細(xì)胞不敏感的靶細(xì)胞，因此γδT細(xì)胞與NK細(xì)胞同樣被認(rèn)為是抗腫瘤免疫監(jiān)視功能的第一道防線。已有研究發(fā)現(xiàn)此類細(xì)胞能在體外殺傷骨髓瘤和淋巴瘤的細(xì)胞系［17］等。循環(huán)的Vγ9Vδ2 T細(xì)胞可選擇性的表達(dá)自然殺傷細(xì)胞受體蛋白1A（NKRP1A），NKRPIA 分子的表達(dá)受IL-12水平的調(diào)控，效應(yīng)性T細(xì)胞在殺傷腫瘤時(shí)可以釋放IL-12，如此可吸引更多的NKRPIA+的γδT細(xì)胞浸潤(rùn)腫瘤組織。肺瘤平膏即可上調(diào)DC與抗原遞呈功能相關(guān)膜分子MHC-Ⅱ，CD80，CD83，CD86及CD40的表達(dá)，并促進(jìn)DC分泌IL-12水平，提高機(jī)體的抗腫瘤免疫監(jiān)視功能［18］。那么，IL-12水平上升后是否對(duì)γδT細(xì)胞產(chǎn)生影響，作者并未做出進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)加以證實(shí)，同時(shí)也未見(jiàn)其他相關(guān)報(bào)道。

2.1.2 對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞的作用樹(shù)突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的遞呈抗原的能力，能顯著刺激T細(xì)胞的活化增殖，起抗腫瘤作用。現(xiàn)代研究認(rèn)為人體免疫功能狀態(tài)即中醫(yī)所指的“正氣”，當(dāng)機(jī)體的免疫功能低下，尤其是細(xì)胞免疫功能低下時(shí)，免疫監(jiān)視機(jī)能下降，DC功能低下，正氣虧虛，機(jī)體易患腫瘤。“久病入絡(luò)”“久痛入絡(luò)”，表明“絡(luò)”既是組織細(xì)胞實(shí)現(xiàn)功能協(xié)調(diào)的物質(zhì)載體，又是疾病在體內(nèi)傳變的中心環(huán)節(jié)［19］。因而應(yīng)用中藥扶正培本，通絡(luò)解毒，通過(guò)干預(yù)和調(diào)節(jié)腫瘤患者DC 的抗原遞呈功能，可能是今后中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤的重要切入點(diǎn)之一［20］。這是在中醫(yī)理論框架內(nèi)，把中醫(yī)扶正培本治則即提高機(jī)體抗邪機(jī)能的機(jī)制與DC抗原遞呈功能有機(jī)地結(jié)合，應(yīng)用扶正培本為主的中藥或復(fù)方制劑，作為外源免疫調(diào)節(jié)劑，通過(guò)多途徑干預(yù)和調(diào)節(jié)患者DC表面分子的表達(dá)，調(diào)節(jié)其抗原遞呈功能，提高患者抗腫瘤機(jī)能，抑制腫瘤形成、增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移。這不但在中西醫(yī)結(jié)合理論上進(jìn)行了闡明，而且又研究了其實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，可謂中西醫(yī)結(jié)合解決抗腫瘤問(wèn)題的典范。

2.2 對(duì)體液免疫的影響腫瘤抗原刺激所產(chǎn)生的抗體是通過(guò)免疫監(jiān)視而產(chǎn)生保護(hù)性作用的，能被抗體所識(shí)別的腫瘤抗原可能是T細(xì)胞活化劑［21］。在用瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定36例放療加艾灸和30例單純放療病人治療前后的IgG，IgA，IgM后，發(fā)現(xiàn)艾灸組免疫球蛋白明顯高于單純放療組，尤其IgG有非常顯著的意義［22］。針刺曲池、合谷、足三里等穴，對(duì)惡性腫瘤放化療患者血清IgG，IgA，IgM含量具有雙向調(diào)節(jié)作用［23］。在腫瘤患者體內(nèi)存在早期階段就出現(xiàn)的針對(duì)腫瘤抗原而產(chǎn)生的免疫應(yīng)答［24］，抗腫瘤抗原的抗體出現(xiàn)常與正常體細(xì)胞的交叉反應(yīng)，引起了許多腫瘤病人的瘤外綜合征［25］。平消膠囊主要成分為郁金、馬錢子粉、仙鶴草、五靈脂、白礬、火硝、干漆(制)、枳殼(熬炒)等藥物，與放療聯(lián)合后能明顯降低血清VCA-IgA，EA-IgA抗體水平，改善生活質(zhì)量，提高近期和遠(yuǎn)期療效［陳緒元，代曉波，張 菊，等. 平消膠囊與放療聯(lián)合治療對(duì)鼻咽癌血清VCA-IgA， EA-IgA影響研究.平消膠囊治療腫瘤論文匯編(西安正大有限公司編)，2003：122］。這些機(jī)制體現(xiàn)了中西醫(yī)結(jié)合治療惡性腫瘤從體液免疫水平分析，不但發(fā)揮了“免疫激發(fā)劑”的作用，而且還發(fā)揮了“免疫抑制劑”的作用，從多方面調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫水平，正符合中醫(yī)辨證治療，以扶正培本為主的特色及優(yōu)勢(shì)。

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3 結(jié)語(yǔ)

中西醫(yī)結(jié)合一直是一個(gè)有爭(zhēng)議的話題，因?yàn)樗鼈兙哂袃蓚€(gè)不同的理論體系。目前中西醫(yī)結(jié)合存在的問(wèn)題是：①還沒(méi)有真正在發(fā)病機(jī)理及治療機(jī)理方面將中西醫(yī)的理論真正揉合起來(lái)或?qū)?yīng)起來(lái)；②對(duì)抗腫瘤藥物的篩選多為將對(duì)腫瘤治療有一定作用的中醫(yī)藥與放化療或其它現(xiàn)行西醫(yī)療法及藥物合用，觀察效果，較為膚淺、生硬，沒(méi)有從機(jī)制上加以闡明；③中醫(yī)“辨證施治”“異病同治，同病異治”的理論優(yōu)勢(shì)沒(méi)有體現(xiàn)出來(lái)，大多為將一種中藥與某種西醫(yī)療法連續(xù)應(yīng)用，沒(méi)有隨機(jī)體免疫狀況或腫瘤發(fā)展?fàn)顩r的變化而調(diào)整治療方案；④結(jié)合中，中醫(yī)藥大多為輔助治療，幾乎沒(méi)有調(diào)整的價(jià)值；⑤對(duì)于中晚期患者的治療遠(yuǎn)期生存率不高；⑥沒(méi)有對(duì)中西藥各成分之間的作用進(jìn)行研究。

當(dāng)然，在近幾十年中西醫(yī)結(jié)合方面也取得了很多成績(jī)，如扶正類中藥在對(duì)放化療耐藥性及副作用治療方面有優(yōu)勢(shì)，中醫(yī)藥在輔助西醫(yī)治療中取得了很大進(jìn)展。另外，中醫(yī)藥在腫瘤預(yù)防及康復(fù)領(lǐng)域具有令世人矚目的成就，并且從中西醫(yī)結(jié)合角度得到了國(guó)際醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可。相信，通過(guò)加強(qiáng)國(guó)內(nèi)外合作研究，與最新研究成果結(jié)合（如計(jì)算機(jī)模擬等），通過(guò)強(qiáng)調(diào)高效、實(shí)用、綜合，中西醫(yī)結(jié)合會(huì)得到全面發(fā)展，中西醫(yī)結(jié)合抗腫瘤研究會(huì)取得突破性的進(jìn)展。

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篇（7）

以單克隆抗體為基礎(chǔ)的治療方法是治療白血病理想的策略。這是因?yàn)橐环矫姘籽〖?xì)胞主要分布在血液、骨髓、肝臟及淋巴結(jié)等抗體容易到達(dá)的部位：另一方面，不同來(lái)源、不同分化階段的細(xì)胞具有特定免疫表型，這就使抗原的靶向性更明確。

1.1 天然抗體

嵌合性人源化抗體能夠在提供抗腫瘤活性的同時(shí)克服鼠抗的免疫原性，這類抗體不但保留了由可變區(qū)決定的鼠抗的抗原特異性，同時(shí)還能通過(guò)其恒定區(qū)刺激人的免疫系統(tǒng)。諸多臨床實(shí)驗(yàn)已證實(shí)了這些抗體對(duì)白血病的療效。M195《鼠抗CD33單抗》為髓性白血病細(xì)胞表面糖蛋白，早期研究表明：M195可以用于治療急性髓性白血病，但由于其人抗鼠抗體(HAMA)反應(yīng)及有限的抗白血病活性限制了它的臨床應(yīng)用。而人源化的M195(HuM195)已被證實(shí)具有不明顯的免疫原活性，Caron等用過(guò)飽和量的HuM195治療10例復(fù)發(fā)難治性的急性白血病(AML)及1例加速期的慢粒白血病(CML)，共用2個(gè)療程，其中3例患者獲得臨床部分緩解，1例AML患者獲得完全緩解(CR)達(dá)4年以上。而Jurcic等用HuM195對(duì)緩解后的APL患者進(jìn)行臨床研究，在22例經(jīng)誘導(dǎo)緩解的APL但存在微小殘留病變(MRD)的患者，經(jīng)HuM195治療后有11例PML/RARα轉(zhuǎn)為陰性，再經(jīng)1個(gè)療程去甲基柔紅霉素聯(lián)合阿糖胞苷化療后，所有患者均轉(zhuǎn)為陰性，3年無(wú)病生存率達(dá)87％。美羅華(rituximab)是一個(gè)抗B細(xì)胞表面抗原CD20的嵌合性單抗，用于治療復(fù)發(fā)性低惡度淋巴瘤有效率可達(dá)48％，用于治療慢淋白血病(CLL)其有效率為50％。目前，美羅華已成為慢淋白血病及B細(xì)胞惰性淋巴瘤的首選治療，與化療合用可以顯著提高療效。CAMPATH-1H是人源化的抗CD52單抗，O'Brien等報(bào)道,41例化療后的B細(xì)胞CLL患者用CAMPATH-1H治療，總有效率46％，其中38％獲得分子生物學(xué)緩解。但由于正常的T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞均表達(dá)CD52,所有患者治療后均出現(xiàn)淋巴細(xì)胞明顯減少，感染的發(fā)生率為56％，因此，盡管CAMPATH-1H可以用于治療CLL,但嚴(yán)重的免疫抑制及伴有巨塊的病例對(duì)藥物缺乏反應(yīng)等可能限制它在臨床的廣泛運(yùn)用。

1.2連接藥物或免疫毒素的抗體

CMA-676是人源化的抗CD33抗體與細(xì)胞毒性藥物刺孢霉素(calicheam-icin)連接而成，刺孢霉素通過(guò)與DNA微槽結(jié)合引起DNA雙鏈斷裂而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性。CMA-676可使復(fù)發(fā)的AML重新達(dá)到完全緩解，而且對(duì)殘留白血病細(xì)胞有較好的殺傷作用。Radich Ⅱ期臨床研究中觀察了59例復(fù)發(fā)的AML患者，經(jīng)CMA-676治療后，其中20例患者有效，15例患者緩解后接受骨髓移植(BMT)或聯(lián)合化療，其中有2例患者無(wú)病生存率達(dá)到5-6年。最近由抗CD22單抗與calincheamicin免疫連接而成的抗體導(dǎo)向藥物CMC-544已進(jìn)入前期臨床研究，最終結(jié)果顯示它對(duì)B細(xì)胞惡性血液病有效。

免疫毒素是植物或細(xì)菌毒素通過(guò)化學(xué)或生物方法與MAb連接而成。當(dāng)它與特異性的細(xì)胞表面受體結(jié)合并內(nèi)化后，可選擇性地殺傷靶細(xì)胞。Kreitman等用BL22(抗CD22抗體的重組免疫毒素)對(duì)耐藥毛細(xì)胞白血病進(jìn)行治療，16例患者中11例完全緩解，2例部分緩解。在11例完全緩解的患者中有3例復(fù)發(fā)，但繼續(xù)用BL22治療后重新獲得緩解。

1.3放免治療

放射免疫治療(radioimmunothera-py,RIT)具有以下優(yōu)勢(shì)：(1)增加天然抗體的療效；(2)對(duì)特定的細(xì)胞或組織類型具有靶向性輻射作用，從而降低了治療的毒性反應(yīng)。因此，它是治療白血病的一項(xiàng)有希望的策略，它有可能改進(jìn)白血病患者的長(zhǎng)期生存結(jié)局。

選擇什么樣的放射性同位素用于臨床，取決于同位素的特性。β質(zhì)粒具有射程長(zhǎng)及低能量的特點(diǎn)，其長(zhǎng)射程決定了β質(zhì)粒不僅能殺傷靶細(xì)胞，而且對(duì)周圍的正常細(xì)胞也有殺傷作用。因此，釋放β質(zhì)粒的放射免疫結(jié)合劑可以用于治療巨塊型的疾病以及在造血干細(xì)胞移植前有選擇性的骨髓全照射。但是，β質(zhì)粒不適合殺滅單一的細(xì)胞以及治療微小殘留病變。已用于治療白血病的放射免疫復(fù)合物，見(jiàn)表1。用131I-HuM195、馬利蘭及環(huán)磷酰胺作為預(yù)處理方案治療16例難治復(fù)發(fā)的AML和14例加速期/急變期CML患者，共27例獲完全緩解，中位生存期為5個(gè)月，最長(zhǎng)者達(dá)90個(gè)月。

與β質(zhì)粒相比，α質(zhì)粒(如212Bi,213Bi,213At和225Ac)射程短，能量高，1-2個(gè)α質(zhì)粒即可殺傷一個(gè)靶細(xì)胞而不損傷臨近的正常細(xì)胞。因此，它更適合于治療微小殘留白血病。

研究表明213Bi-M195能選擇性地殺傷靶細(xì)胞、對(duì)復(fù)發(fā)或難治AML有明顯的抗白血病效應(yīng)，尤其是對(duì)瘤負(fù)荷較低的患者，Jurcic等用213Bi-HuM195治療18例復(fù)發(fā)難治AML或CML，17例出現(xiàn)骨髓抑制，中位恢復(fù)期為22d,大部分患者骨髓或外周血原始細(xì)胞減少，顯示了213Bi-HuM195相對(duì)安全及可行的抗白血病效應(yīng)。

2.白血病疫苗

對(duì)腫瘤相關(guān)抗原的認(rèn)知促進(jìn)了抗腫瘤疫苗的發(fā)展，誘導(dǎo)特異性識(shí)別的目的是為了發(fā)揮特異的免疫治療功能，從而清除殘留的白血病細(xì)胞，達(dá)到治愈白血病的目的。隨著對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)生物學(xué)的進(jìn)一步了解以及細(xì)胞疫苗安全用于患者的報(bào)道，免疫學(xué)家、細(xì)胞生物學(xué)家及臨床科學(xué)家們已經(jīng)成功地研究出了針對(duì)各種惡性腫瘤新的、有希望的治療策略。DC是已知的功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞，其最大特點(diǎn)是能有效地刺激初始型T細(xì)胞誘發(fā)免疫應(yīng)答。當(dāng)前DC疫苗的相關(guān)實(shí)驗(yàn)獲得了令人鼓舞的結(jié)果，DC抗白血病免疫治療的應(yīng)用已成為白血病主動(dòng)特異性免疫治療的研究熱點(diǎn)。

2.1 急性髓性白血病(AML)

在1999年choudhury等在體外培養(yǎng)急性髓性白血病(AML)DC時(shí)發(fā)現(xiàn)，該類細(xì)胞在體外能刺激細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)反應(yīng)，并對(duì)AML自身白血病細(xì)胞具

有靶向性，但對(duì)外周血中非白血病起源的單核細(xì)胞無(wú)此作用。Harrison等用同樣的方法在對(duì)更多的樣本研究中進(jìn)一步證實(shí)了該點(diǎn)。由此表明：AML細(xì)胞衍生DC(AML/DC)能增強(qiáng)同種異體免疫應(yīng)答，并能通過(guò)AML/DC的反復(fù)刺激誘導(dǎo)特異性的自體CTL。由于AML表達(dá)大量的白血病細(xì)胞相關(guān)抗原，因此它可望成為AML疫苗治療的特異性靶點(diǎn)。Scheibenbogen等研究發(fā)現(xiàn)：急性髓性白血病患者表達(dá)腎母細(xì)胞瘤基因WT1及絲氨酸的蛋白水解酶3。目前對(duì)WT1基因與釘形貝血藍(lán)蛋白結(jié)合，以GM-CSF為佐劑的多肽疫苗的研究已進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)。Moll-drom等將水解蛋白酶3肽與弗氏佐劑及GM-CSF非完全結(jié)合后用于15例AML、CML及MDS患者，其中8例出現(xiàn)了特異性的免疫反應(yīng)，2例難治的AML患者獲得了持續(xù)的分子生物學(xué)緩解。

2.2慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)

Orsini等在研究時(shí)發(fā)現(xiàn),CLL細(xì)胞對(duì)DC的成熟及功能有直接的抑制作用。而Krackhardt等在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)CLL患者的自身T細(xì)胞不僅對(duì)CD40活化的(CD40activated)CLL細(xì)胞應(yīng)答減弱，而且對(duì)抗原DC載有凋亡的CLL細(xì)胞的反應(yīng)明顯降低，并由此提出CLL患者的T細(xì)胞池可能存在CLL特異性的免疫耐受。

Coddard等在體外采用CLL細(xì)胞進(jìn)行特異性T細(xì)胞誘導(dǎo)，實(shí)驗(yàn)表明：CLL細(xì)胞能與單核細(xì)胞衍生的DC融合，這些雜交瘤細(xì)胞能誘導(dǎo)擴(kuò)增CTL并對(duì)CLL細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒作用。最近Volker等在體外已成功誘導(dǎo)出CLL特異性的CTL反應(yīng)。有趣的是在體外誘導(dǎo)出T細(xì)胞，有的能識(shí)別CLL淋巴細(xì)胞，而這些淋巴細(xì)胞特異性表達(dá)來(lái)自于腫瘤相關(guān)抗原(TAA)生存素的抗原決定簇。由此提出：該生存素可望成為一類與CLL細(xì)胞特異性靶向結(jié)合的備選抗原。Volker等最近還鑒定出一種多肽物質(zhì)，它來(lái)源于adipophilin蛋白，能與HLA-A2結(jié)合。用其誘導(dǎo)細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞，能溶解經(jīng)adipophilin處理的腫瘤細(xì)胞，從而提出該肽，可以用于研制CLL特異性的疫苗。

2.3　慢性髓細(xì)胞白血病(CML)

早在1998年,Yotnda等采用CML的HLA I類限制性多肽(限定bcr-abl融合基因)在體外誘導(dǎo)CML特異性T細(xì)胞免疫，該實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CTL不僅對(duì)負(fù)載HLA l類限制性多肽靶細(xì)胞有反應(yīng)，而且對(duì)bcr-abl陽(yáng)性的白血病細(xì)胞也有反應(yīng)。近來(lái)有人采用bcr-abl6肽+QS-21對(duì)14例CML患者進(jìn)行了臨床觀察，效果顯著，所有患者均產(chǎn)生特異性的DTH反應(yīng)，其中12例患者在反復(fù)多次注射疫苗后產(chǎn)生了特異性的T細(xì)胞增殖反應(yīng)。遺憾的是該組患者14例中的10例在其間同時(shí)也采用了有效的抗CML的治療方法(如供者淋巴細(xì)胞輸注及使用甲磺酸伊馬替尼)，這些患者雖然產(chǎn)生了不同的臨床反應(yīng)，但是否為多肽疫苗與其他藥物的協(xié)同作用，目前還不得而知。

絲氨酸水解蛋白酶3僅存于髓系細(xì)胞，它對(duì)確定AML相關(guān)抗原具有重要價(jià)值。在早期體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：CML特異性的T細(xì)胞對(duì)水解蛋白酶3具有靶向性，基于此,Molldrem等研究了不同階段的38例CML患者，這些患者均表現(xiàn)出水解蛋白酶3特異性的CTL反應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：這些患者在經(jīng)α-干擾素治療及異基因骨髓移植后，其體內(nèi)的絲氨酸水解蛋白酶3特異性T細(xì)胞的量與臨床反應(yīng)有著明顯的關(guān)聯(lián)性，由此提示：絲氨酸水解蛋白酶3特異性的CTL可能會(huì)增強(qiáng)CML患者臨床治療的藥物敏感性，我們有希望通過(guò)免疫學(xué)方法來(lái)改善CML的治愈率。

近15年來(lái)，許多學(xué)者在體外采用不同的方法對(duì)白血病疫苗的研究作了大量的工作，I期臨床實(shí)驗(yàn)中已有小樣本的觀察報(bào)道，最有希望的是水解蛋白酶3和WT1多肽用于治療AML。對(duì)于CML來(lái)說(shuō)，使用bcr-abl多肽疫苗以及CML/DC細(xì)胞疫苗，已有小樣本病例的觀察報(bào)道，到目前為止，對(duì)CML免疫學(xué)方面的研究結(jié)果令人鼓舞。

3．細(xì)胞因子的應(yīng)用

作為免疫治療方法之一，應(yīng)用CIK細(xì)胞治療白血病具有良好的應(yīng)用前景。CIK即細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cy-tokine-inducedkillercell,CIK)，它是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxicTlympho-cytes,CTL)的一種獨(dú)特亞型，它能同時(shí)表達(dá)CD3和CD56分子，也被稱作NK細(xì)胞樣T淋巴細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)表明：在體外人外周血淋巴細(xì)胞用多種細(xì)胞因子(如OKT-3,IL-2，IFN-r等)培養(yǎng)可生長(zhǎng)出大量CIK細(xì)胞，它具有以下的特點(diǎn)：(1)CIK細(xì)胞增殖速度快，培養(yǎng)22d 候 CD3+、CD56+的CIK細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量可提高1000倍；(2)對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效率高；(3)CIK細(xì)胞在識(shí)別和殺滅靶細(xì)胞時(shí)是非MHC限制性的，殺瘤范圍廣；(4)對(duì)多藥耐藥的腫瘤細(xì)胞同樣敏感；(5)殺瘤活性不受免疫抑制劑CsA,FK506影響；(6)對(duì)正常骨髓造血前體細(xì)胞影響較小；(7)能抵抗腫瘤細(xì)胞引起的Fas-FasL凋亡。

篇（8）

免疫分析的發(fā)展伴隨著抗體制備技術(shù)的改進(jìn)而不斷提高。美國(guó)科學(xué)家Yalow等人首先將標(biāo)記技術(shù)引入免疫分析，他們首先用放射免疫分析法(RIA)進(jìn)行測(cè)定胰島素。由于這種試驗(yàn)方法限制了試劑的壽命，難以獲得長(zhǎng)期穩(wěn)定的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)由于存在同位素的使用，不僅會(huì)損害操作人員身體健康，也會(huì)帶來(lái)污物處理困難的問(wèn)題。為了找到更為合理的免疫分析法成為以后20年來(lái)研究的熱點(diǎn)。直到70年代末，國(guó)外有學(xué)者將免疫反應(yīng)與化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)相結(jié)合，這種集高靈敏度和高特異性的技術(shù)稱之為化學(xué)發(fā)光免疫分析法，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)優(yōu)勢(shì)比較明顯，主要有以下幾點(diǎn)：第一，靈敏度高，檢測(cè)限范圍更精準(zhǔn);第二，自動(dòng)化程度高，并且沒(méi)有放射性輻射危害;第三，發(fā)光標(biāo)記物穩(wěn)定，有效期長(zhǎng)，同時(shí)應(yīng)用范圍寬，對(duì)于分子大小不同的抗原、半抗原及抗體都可檢測(cè)。因此，化學(xué)發(fā)光免疫分析在臨床、衛(wèi)生、食品、環(huán)保和軍事等領(lǐng)域正被越來(lái)越多地用于激素、蛋白質(zhì)、腫瘤、毒物、病毒等成分檢測(cè)。

2 免疫分析基本原理

由免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)兩個(gè)關(guān)鍵部分組成了化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理，化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)主要氧化以及催化的作用于化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，產(chǎn)生一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體，在處于穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，發(fā)射出光子，然后通過(guò)測(cè)量?jī)x器測(cè)量光量子。通過(guò)標(biāo)記物與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系，進(jìn)而測(cè)出被測(cè)物質(zhì)含量。而免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)在抗原或抗體上直接標(biāo)記。

3 化學(xué)免疫分析分類

化學(xué)發(fā)光免疫分析法主要以標(biāo)記法的不同來(lái)進(jìn)行分類，目前習(xí)慣上將免疫分析法主要分為兩類，第一主要是標(biāo)記免疫分析法，其次是酶免疫分析法，前者是以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記，后者是以酶標(biāo)記，以化學(xué)發(fā)光底物作為信號(hào)試劑來(lái)進(jìn)行發(fā)光，其原理是不相同的。除此之外，包括熒光免疫分析法以及電化學(xué)發(fā)光免疫分析法也是目前存在的化學(xué)免疫法分析方法。

3.1 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析

將化學(xué)發(fā)光劑如吖啶酯類化合物，直接標(biāo)記在抗原上或抗體上，其基本原理是啟動(dòng)發(fā)光劑發(fā)光，快速閃爍。這種標(biāo)記物其化學(xué)反應(yīng)簡(jiǎn)單、快速、無(wú)須催化劑;夾心法用于大分子抗原，競(jìng)爭(zhēng)法主要用于檢測(cè)小分子抗原，另外本底低，非特異性結(jié)合相對(duì)較少光量不會(huì)因?yàn)榉肿哟笮《苡绊懀虼四茉黾屿`敏度，一般常用的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)主要是通過(guò)啟動(dòng)發(fā)光試劑NaOH-H2O2作用而發(fā)光，其發(fā)光非常迅速，小分子物質(zhì)多采用競(jìng)爭(zhēng)法，夾心法主要用于大分子物質(zhì)。

3.2 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析

通過(guò)酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)，再作用于發(fā)光底物，在信號(hào)劑的作用下發(fā)光，然后用發(fā)光測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。化學(xué)發(fā)光酶免疫分析酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑，按照標(biāo)記免疫分析，應(yīng)屬酶免疫分析，其操作步驟與酶免分析完全相同。目前常用的標(biāo)記酶為堿性磷酸酶和辣根過(guò)氧化物酶，它們有各自的發(fā)光底物。化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法種類大致有三種，首先是HRP標(biāo)記CLEIA，一般常用3-氨基鄰苯二甲酰肼作為底物，也即是魯米諾或者用其衍生物4-氨基鄰苯二甲酰肼也是可以的，這兩種都是重要的發(fā)光試劑。需要注意的是該底物需要在堿性緩沖溶液中進(jìn)行氧化反應(yīng)，生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)然這需要在過(guò)氧化物酶及活性氧存在的條件下進(jìn)行，中間體回到基態(tài)時(shí)就可以發(fā)光，此時(shí)的波長(zhǎng)一般在425nm。曾經(jīng)先前有人用該標(biāo)記底物標(biāo)記抗原或抗體，但后來(lái)發(fā)現(xiàn)其發(fā)光強(qiáng)度多受靈敏度的影響。目前用過(guò)氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記，其發(fā)光強(qiáng)度主要依賴酶免疫反應(yīng)中的酶的濃度大小;其次增強(qiáng)發(fā)光酶免疫分析也是化學(xué)發(fā)光酶免疫分析的一種，它主要是在將增強(qiáng)的發(fā)光劑加入到發(fā)光系統(tǒng)中，加強(qiáng)發(fā)光的信號(hào)強(qiáng)度，并且能夠保持長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定性，在一定程度上提高了該分析方法的準(zhǔn)確性和靈敏度，便于多次測(cè)定。目前在一些現(xiàn)代化的設(shè)備上，還可以由計(jì)算機(jī)進(jìn)行精確控制操作，比如，往系統(tǒng)中加入發(fā)光試劑以及混合、溫育、洗滌等，甚至后期的數(shù)據(jù)處理，進(jìn)而繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終完成患者血清樣品的分析并打印出結(jié)果;最后一種就是用ALP標(biāo)記的CLEIA，這種分析方法一般多用環(huán)-1，22-二氧乙烷衍生物作為發(fā)光底物，它的發(fā)光原理主要是其用化學(xué)發(fā)光酶免疫分析底物而設(shè)計(jì)的分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)固，其中的芳香基作為發(fā)光基團(tuán)和酶作用，在發(fā)光試劑的作用下發(fā)光，該底物在堿性磷酸酶的作用下，磷酸酯基發(fā)生水解而脫去一個(gè)磷酸基，就會(huì)產(chǎn)生一個(gè)穩(wěn)定的中間體，然后中間體發(fā)生裂解會(huì)產(chǎn)生金剛烷酮和激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，這種常見(jiàn)底物是AMPPD，其作為磷酸酯酶的直接化學(xué)發(fā)光底物，多用來(lái)檢測(cè)堿性磷酸酯酶和一些配基的結(jié)合物。

4 應(yīng)用

4.1 激素、蛋白質(zhì)和腫瘤檢測(cè)

該系統(tǒng)使反應(yīng)物形成均相混懸液，順磁微粒作為固定相，增大反應(yīng)面積，加速免疫反應(yīng)，快速分離，自動(dòng)洗滌，減少酶和催化劑的使用，pH調(diào)整即可，避免了許多影響因素，廣泛應(yīng)用于甲狀腺功能、藥物檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物及心血管等項(xiàng)目。

4.2 病毒、毒物檢測(cè)

楊秀岑等用ABEI標(biāo)記兔抗大腸桿菌lgG，試樣溫育、離心、沉淀峰值用luminol-H2O2-NaOH 發(fā)光體系測(cè)定;章竹君等測(cè)定了糞樣中的輪狀病毒以HRP酶標(biāo)記;為研究TNT對(duì)人體的毒害作用提供方法，張麗民等以HRP標(biāo)記免疫測(cè)定了血清中4-氨基-2，6-二硝基甲苯，效果非常顯著。

4.3 其他方面的應(yīng)用

篇（9）

【關(guān)鍵詞】

人文教育；促進(jìn)；大學(xué)生；全面發(fā)展；研究

0 引言

近年來(lái)，高職院校中不同程度存在著重專業(yè)、輕素質(zhì)，重教育、輕德育的現(xiàn)象，過(guò)分重視專業(yè)技能和職業(yè)能力的培養(yǎng)，從而導(dǎo)致忽視學(xué)生全面素質(zhì)的提高。形成部分學(xué)生辨別是非能力差，思想認(rèn)識(shí)水平低；心理脆弱，公德意識(shí)低下。當(dāng)學(xué)生走出校門(mén)后，獨(dú)立生活能力差，社會(huì)適應(yīng)能力低，處理人際關(guān)系能力差，缺乏自我保護(hù)意識(shí)，承受心理壓力的能力及應(yīng)變能力缺乏等等，造成在相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)不能適應(yīng)工作環(huán)境。因此，在高職院校中加強(qiáng)人文教育，使學(xué)生全面發(fā)展，具有健全人格是十分必要的。

1 以人文教育促進(jìn)大學(xué)生全面發(fā)展的研究

1.1 轉(zhuǎn)變觀念，樹(shù)立全面發(fā)展的教育理念

很多人認(rèn)為高職教育主要是傳授知識(shí)，培養(yǎng)技能，是一種“技術(shù)教育”，實(shí)際上這種看法是片面的，它忽視了教育的本質(zhì)。誠(chéng)然，培養(yǎng)技術(shù)型人才是高職院校的教育目標(biāo)，但是我們培養(yǎng)的不能僅僅是一個(gè)只懂計(jì)算機(jī)或只會(huì)做帳的人，如果是這樣的話，那么學(xué)校充其量只能是一個(gè)培養(yǎng)“工具性”人才的作坊。高職學(xué)校在授予學(xué)生現(xiàn)代科學(xué)知識(shí)、技能和理論的同時(shí)，應(yīng)對(duì)他們進(jìn)行有效的人文素質(zhì)教育，提高他們的道德水平，教會(huì)他們做人之道，使他們真正成為心智與人格全面發(fā)展的有用之才。作為高職教育者應(yīng)該認(rèn)識(shí)到高職教育首先是教育、是育人，然后才是職業(yè)教育。教育的首要目的是使人成為“人”，其次才是“才”。為此，高職院校應(yīng)改變以往的只注重技能訓(xùn)練的技術(shù)教育，而轉(zhuǎn)向人的全面發(fā)展的教育。也只有這樣，高職學(xué)校才可能有廣闊的發(fā)展前景。

1.2 實(shí)現(xiàn)人文環(huán)境與自然環(huán)境的統(tǒng)一

校園文化場(chǎng)所、校園環(huán)境建設(shè)是校園文化建設(shè)的物質(zhì)載體。加強(qiáng)校園文化建設(shè)，優(yōu)化育人環(huán)境，發(fā)揮環(huán)境育人功能，必須建設(shè)整潔、優(yōu)美、有序的校園環(huán)境，營(yíng)造濃郁的校園文化氛圍。校園建筑布局合理、設(shè)計(jì)新穎、錯(cuò)落有致、樸素典雅、造型寓意各具特色。校園內(nèi)的道路彎直有形，長(zhǎng)廊亭閣、別有風(fēng)味，樹(shù)木豐茂、花草宜人，校牌校訓(xùn)、引人注目，櫥窗報(bào)欄規(guī)范精致，標(biāo)語(yǔ)宣傳、賦予感召力，辦公室、教室、圖書(shū)館、實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)場(chǎng)所、體育場(chǎng)館、餐廳宿舍布置協(xié)調(diào)。學(xué)校制定、實(shí)施以人為本并符合教育規(guī)律的規(guī)章制度，師生衣著整潔、言行文明、人際關(guān)系和諧，形成良好的校風(fēng)、學(xué)風(fēng)、教風(fēng)、班風(fēng)、作風(fēng)，特別是共同的價(jià)值觀念所反映出的學(xué)校精神無(wú)時(shí)不滲透在師生的行為當(dāng)中，成為引領(lǐng)全體師生奮發(fā)向上的精神力量。

大力開(kāi)展人文教育，讓豐富多彩的校園文化活動(dòng)為大學(xué)生提供一個(gè)鍛煉、提高和展示自我的舞臺(tái)，也為其實(shí)踐志趣、擴(kuò)大交往開(kāi)辟了一個(gè)廣闊天地。校園文化活動(dòng)內(nèi)容主要包括建設(shè)良好的文化環(huán)境、堅(jiān)持開(kāi)展經(jīng)常性活動(dòng)、開(kāi)展主題教育活動(dòng)等，活動(dòng)中要充分體現(xiàn)“以學(xué)生為本”的思想。校園文化建設(shè)是校園文明建設(shè)和校園精神培育的載體，是豐富學(xué)生業(yè)余文化生活、構(gòu)建精神家園、營(yíng)造健康心理氛圍的有力保障，也是提高學(xué)生綜合素質(zhì)的重要途徑。高職教育的目的要求高職院校在校園文化活動(dòng)中，要兼顧學(xué)生的業(yè)務(wù)素質(zhì)和適應(yīng)社會(huì)的能力，始終堅(jiān)持以愛(ài)國(guó)主義教育為重點(diǎn)，以科技、文娛、體育和社會(huì)實(shí)踐活動(dòng)為基礎(chǔ)，以提高學(xué)生的人文素質(zhì)教育為目標(biāo)，努力提高校園文化建設(shè)的品位。開(kāi)展校園文化活動(dòng)，除了抓住契機(jī)外，還應(yīng)充分挖掘、整合各種合理資源，可發(fā)揮大學(xué)生社團(tuán)組織的積極作用。

1.3 實(shí)行科技教育與人文教育的有機(jī)結(jié)合

通過(guò)舉行大量的學(xué)術(shù)研討會(huì)、專題報(bào)告、知識(shí)競(jìng)賽等知識(shí)性校園文化活動(dòng)，擴(kuò)大學(xué)生的信息量，突破課堂教學(xué)的封閉性，調(diào)整學(xué)生的知識(shí)結(jié)構(gòu)，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。開(kāi)展一些娛樂(lè)性校園文化活動(dòng)，如歌詠、書(shū)畫(huà)等既有利于學(xué)生審美情趣的提高，又有利于拓寬學(xué)生的視野，提高他們的感受力、理解力、想象力，從而提高他們學(xué)習(xí)科學(xué)文化知識(shí)的興趣和能力。尤其要注重立足專業(yè)，開(kāi)展社會(huì)調(diào)查、科技創(chuàng)新等實(shí)踐活動(dòng)，鍛煉學(xué)生的實(shí)踐能力。這是由高職教育的培養(yǎng)目標(biāo)決定的。

1.4 提高學(xué)生的綜合素質(zhì)

在人文精神教育中，使學(xué)生樹(shù)立了敬業(yè)態(tài)度和社會(huì)責(zé)任感，增強(qiáng)了精益求精的工作理念和堅(jiān)忍不拔、知難而進(jìn)的勃勃向上的精神，這使得學(xué)生在實(shí)踐技能上更易超越常人，更易在自由的職業(yè)中做出出色的業(yè)績(jī)和貢獻(xiàn)。

人文教育是通過(guò)對(duì)學(xué)生進(jìn)行基礎(chǔ)教育達(dá)到提高學(xué)生綜合素質(zhì)的目的。通過(guò)基礎(chǔ)教育，讓學(xué)生學(xué)會(huì)行使權(quán)利與義務(wù)，發(fā)展道德觀與價(jià)值觀，培養(yǎng)表達(dá)能力、閱讀能力、獨(dú)立思考、解決問(wèn)題和辨別價(jià)值標(biāo)準(zhǔn)的能力，了解文化傳統(tǒng)，適應(yīng)并改進(jìn)所處環(huán)境，保持個(gè)人身心健康，發(fā)展理解事物和與人交往的能力。

1.5 利用現(xiàn)代信息技術(shù)增強(qiáng)素質(zhì)教育的吸引力和感染力

大眾傳媒也對(duì)學(xué)生的人文素質(zhì)教育起著重大影響。現(xiàn)代媒介形態(tài)的變化促使大眾傳媒逐漸加大其在新聞與娛樂(lè)之外的直接教化功能，學(xué)術(shù)演講、文化對(duì)話，藝術(shù)星空等性質(zhì)的欄目層出不窮。人們?cè)诰W(wǎng)絡(luò)、電視屏幕和光盤(pán)上閱讀文學(xué)名著，欣賞美術(shù)作品、聆聽(tīng)名人名家的教誨或者參與對(duì)話。以互聯(lián)網(wǎng)為代表的現(xiàn)代傳播工具的普及對(duì)大學(xué)生的思想產(chǎn)生了越來(lái)越大的影響。人文素質(zhì)教育應(yīng)充分利用這一載體，如熱線電話，建立工作網(wǎng)站，班級(jí)主頁(yè)，電子信箱，留言板，聊天室等，使人文素質(zhì)教育不再受時(shí)間，地點(diǎn)，身份的限制。

篇（10）

1 高膽固醇血癥概況

高LDL在美國(guó)人群中較為常見(jiàn)，美國(guó)心臟協(xié)會(huì)2015年的報(bào)告顯示其比例高達(dá)人口總數(shù)的31.7%。10月24日，《中國(guó)成人血脂異常防治指南（2016年修訂版）》：中國(guó)成人血脂異常總體患病率高達(dá)40.4%；我國(guó)居民血脂異常患病率持續(xù)升高，冠心病死亡率快速增加，專家預(yù)測(cè)隨著人群血清膽固醇水平持續(xù)升高，可能導(dǎo)致2010～2030年我國(guó)心血管病事件增加約920萬(wàn)[1]。隨著生活水平的不斷提高，當(dāng)今社會(huì)人們的飲食普遍超標(biāo)，并且缺乏足夠的體育鍛煉，因此導(dǎo)致膽固醇水平尤其是低密度脂蛋白膽固醇水平升高從而引起很多健康問(wèn)題。另一方面，目前單純依靠飲食控制、有規(guī)律的體育鍛煉以及戒煙等生活方式的改變已經(jīng)不足以有效控制膽固醇水平。因此，美國(guó)最新的膽固醇指南建議動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病（Arteriosclerotic Cardiovascular Disease，ASCVD）特定高危人群應(yīng)適當(dāng)服用藥物進(jìn)行預(yù)防和治療[2]。

2 高膽固醇血癥的治療方法

目前用于治療高膽固醇血癥的藥物包括他汀、選擇性膽固醇吸收抑制劑、膽汁酸螯合劑、貝特類、煙堿酸、Omega-3脂肪酸等，其中他汀是世界公認(rèn)的支柱藥物。根據(jù)2013年美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)和美國(guó)心臟協(xié)會(huì)的成人降低ASCVD風(fēng)險(xiǎn)的血膽固醇治療指南，大量證據(jù)表明他汀可以預(yù)防和治療ASCVD以及除心衰患者心功能NYHAⅡ-Ⅲ級(jí)和正在接受透析治療之外的所有高風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體。另外，這些指南建議如果他汀治療無(wú)效、有禁忌或因副作用不能耐受時(shí)前述的非他汀類降膽固醇治療藥物可以作為單藥治療或者聯(lián)合治療的選擇，這表明他汀不耐受患者及他汀治療無(wú)效患者需要合適的藥物來(lái)替代他汀。

3 PCSK-9抑制劑

3.1 PCSK-9基因及PCSK-9蛋白 PCSK-9基因是研究人員在家族性高膽固醇血癥（Familial Hypercholesterolemia，F(xiàn)H）的患者中發(fā)現(xiàn)的，該基因具有高度多態(tài)性[3]，它可以導(dǎo)致常染色體顯性遺傳的表型，PCSK-9的功能獲得和功能缺失型突變可以分別導(dǎo)致高膽固醇血癥和低膽固醇血癥的發(fā)生，突變導(dǎo)致FH及該人群中血脂的代謝過(guò)程陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)[4]。PCSK-9是除LDLR和APOB外第三個(gè)與FH有關(guān)的基因，其位于染色體lp3.32，DN段大小為3617bp，該基因編碼的PCSK-9前蛋白共有692個(gè)氨基酸，大小為72kD，屬于不具有活性的糖蛋白，該前蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中可進(jìn)行自身催化，并裂解產(chǎn)生成熟的PCSK-9蛋白（62kD）[5]、前結(jié)構(gòu)域和C-末端結(jié)構(gòu)域等片段。自身催化裂解過(guò)程對(duì)于PCSK-9蛋白極為重要，是其從細(xì)胞內(nèi)排出并發(fā)揮正常功能的必要條件[6]。正常情況下低密度脂蛋白受體（Low Density Lipoprotein Receptor，LDL-R）與LDL顆粒可以結(jié)合并通過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入肝細(xì)胞，LDL顆粒在溶酶體內(nèi)降解，而LDL-R則回到細(xì)胞表面并繼續(xù)結(jié)合另外的LDL顆粒[7]，但LDL-R與PCSK-9結(jié)合后其也成了降解的目標(biāo)。肝細(xì)胞表面LDL-R具有表皮生長(zhǎng)因子樣重復(fù)結(jié)構(gòu)域A（Epidermal Growth Factor Like Repeat Domain A，EGF-A），成熟的PCSK-9蛋白可以與EGF-A結(jié)合成復(fù)合體，并通過(guò)細(xì)胞胞飲作用轉(zhuǎn)運(yùn)至內(nèi)涵體/溶酶體，從而導(dǎo)致LDL-R降解[7，8]。因此，LDL-R可以避免返回細(xì)胞膜表面循環(huán)利用降解LDL，從而抑制了循環(huán)血LDL的分解代謝[4]。如果PCSK-9基因發(fā)生獲得突變，其高活性可以使LDL-R過(guò)度的降解，進(jìn)而減少了LDL在血中的移動(dòng)，因此增加了LDL水平[9]，這一過(guò)程受體內(nèi)PH、性別、日夜、空腹飽腹等因素影響。如果突變是PCSK-9基因外顯子中的鳥(niǎo)苷酸變?yōu)榘账酨1位點(diǎn)處出現(xiàn)前PCSK-9蛋白原氨基酸，其可以抑制PCSK-9前蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的自身催化裂解，因此PCSK-9成熟、分泌減少，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞表面的LDL-R降解減少，LDL水平降低[10]。另外，PCSK-9蛋白與極低密度脂蛋白受體、載脂蛋白受體結(jié)合也可參與影響極低密度脂蛋白和載脂蛋白地降解[11]。LDL-R與PCSK-9的作用很弱，幾乎只發(fā)生在腎上腺和大腦區(qū)域，因此不會(huì)通過(guò)上述途徑剝奪膽固醇；目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn)研究表明PCSK-9超表達(dá)以及敲低表達(dá)都會(huì)對(duì)膽固醇的含量產(chǎn)生影響[12，13]。

3.2 PCSK-9抑制劑作用機(jī)制和現(xiàn)狀 PCSK-9蛋白屬于肝臟內(nèi)前蛋白轉(zhuǎn)換酶家族，內(nèi)源性的PCSK-9原則上是在小腸和肝內(nèi)合成的，其作為神經(jīng)細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化酶可以通過(guò)細(xì)胞內(nèi)自催化轉(zhuǎn)化分裂，并進(jìn)入血循環(huán)中與LDL-R結(jié)合，形成受體復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞；該復(fù)合物可以在內(nèi)涵體或溶酶體內(nèi)被降解，因此可以直接影響血漿LDL濃度。相反，如果PCSK-9蛋白酶缺失，則受體在與血膽固醇結(jié)合后會(huì)被運(yùn)回質(zhì)膜，從而增加循環(huán)血LDL-R的轉(zhuǎn)運(yùn)，加速LDL降解，PCSK-9表達(dá)下降會(huì)使LDL-R活性增高從而導(dǎo)致LDL降低。因此，PCSK-9抑制劑可以通過(guò)LDL-R分解脂蛋白來(lái)降低病人體內(nèi)的LDL水平[4]，干擾PCSK-9的活性即這類新藥的關(guān)鍵作用機(jī)制。目前市面上的PCSK-9抑制劑有小干擾RNA、反義寡核苷酸和單克隆抗體三類[14]，前兩類也合稱RNA干擾技術(shù)，均是通過(guò)與PCSK-9的信使RNA結(jié)合使其沉默或者干擾其活動(dòng)從而導(dǎo)致LDL濃度降低；目前研究比較多的 PCSK-9抑制劑是主要目標(biāo)為PCSK-9基因的單克隆抗體，此類藥在不抑制肝細(xì)胞攝取循環(huán)中LDL顆粒的基礎(chǔ)上，主要和PCSK-9蛋白內(nèi)部結(jié)構(gòu)中可以與LDL-R作用的相鄰的重要區(qū)域結(jié)合，阻止與LDL-R結(jié)合，從而降低血液中PCSK-9的活性，以此來(lái)達(dá)到降脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。FDA批準(zhǔn)的這兩種結(jié)構(gòu)的藥物均是皮下注射劑型，而單克隆抗體可能引起點(diǎn)反應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)或關(guān)于注射執(zhí)行部位的區(qū)域毒性[15]，但目前正在進(jìn)行的臨床試驗(yàn)表明它們均有相對(duì)良好的耐受。這類藥物啟動(dòng)時(shí)的目標(biāo)指向FH，不過(guò)大量臨床試驗(yàn)表明PCSK-9抑制劑可以作為他汀不耐受或?qū)λ∮胁涣挤磻?yīng)的患者的替代選擇。PCSK-9抑制劑是近年FDA批準(zhǔn)的降低血膽固醇治療藥物中極引人注目的一類，因其潛在的良好藥效極有可能超過(guò)或改變目前膽固醇的治療模式。2015年7月24日FDA批準(zhǔn)了世界上第一個(gè)PCSK-9抑制劑，即賽諾菲公司的Alirocumab（Praluent）。Alirocumab被FDA批準(zhǔn)表明除了飲食和最大可耐受劑量的他汀外，雜合型FH或臨床ASCVD成年患者有了降膽固醇治療的輔助治療手段。2015年8月27日FDA批準(zhǔn)了第二個(gè)PCSK-9抑制劑Evolocumab（Repatha）。Rephtha被FDA批準(zhǔn)用于成人雜合子FH、純合子FH或臨床ASCVD疾病除飲食及最大可耐受劑量他汀治療的聯(lián)合治療。

3.3臨床試驗(yàn) PCSK-9抑制劑正在進(jìn)行很多Ⅱ期和Ⅲ期試驗(yàn)，目前的試驗(yàn)主要針對(duì)Evolocumab和Alirocumab，臨床試驗(yàn)涉及Alirocumab的包括ODYSSEY COMBO Ⅱ、ODYSSEY FH和單藥治療Ⅲ期試驗(yàn)；涉及Evolocumab的包括GAUSS-2試驗(yàn)、OSLER試驗(yàn)和RUTHERFORD試驗(yàn)，研究已經(jīng)對(duì)其在短和長(zhǎng)期效果和安全性方面做出了評(píng)價(jià)。

3.3.1 Alirocumab

3.3.1.1 ODYSSEY COMBOⅡ COMBOⅡ是歐洲、美洲、韓國(guó)等126個(gè)中心參與的為期104 w的雙盲、雙啞、活性控制、平行組試驗(yàn)，該試驗(yàn)主要是比較有心血管高風(fēng)險(xiǎn)的高膽固醇血癥患者在最大可耐受劑量他汀治療仍控制不佳時(shí)Alirocumab和依折麥布作為輔助治療的效果[16]。患者被隨機(jī)分成2：1，兩組同時(shí)接受最大可耐受他汀治療的情況下每2 w皮下注射Alirocumab75 mg同時(shí)口服安慰劑或口服依折麥布同時(shí)皮下注射安慰劑。試驗(yàn)的初級(jí)目標(biāo)是計(jì)算從基線到第24 w低密度脂蛋白膽固醇（Low Density Lipoprotein-cholesterol，LDL-C）變化的百分比，Alirocumab組為-50.6±1.4%，依折麥布組為-20.7±1.9%，其差距達(dá)到-29.8（P

試驗(yàn)結(jié)論是Alirocumab被證明比目前標(biāo)準(zhǔn)治療藥物依折麥布具有更有效的降低LDL-C效果，且Alirocumab在患者中耐受良好，因此提供了與依折麥布類似的干凈描述[16]。

3.3.1.2 Alirocumab單藥治療 這個(gè)Ⅲ期、隨機(jī)、雙盲、雙啞研究評(píng)估了對(duì)于有中等心血管風(fēng)險(xiǎn)的高膽固醇血癥患者且此前沒(méi)有接受他汀或其他降脂治療，在接受Alirocumab與依折麥布治療后的有效性和安全性的對(duì)比[17]。患者每天口服依折麥布10 mg或每2 w皮下注射Alirocumab75 mg且假設(shè)第8wLDL-C≥70 mg/dL，在第12 w時(shí)將滴定劑量增加到每2 w皮下注射Alirocumab150 mg。試驗(yàn)初級(jí)終點(diǎn)是Alirocumab與依折麥布組從基線水平到第24 w平均LDL改變的百分比，Alirocumab在24 w時(shí)可以比依折麥布降低更多的載脂蛋白B、總膽固醇、非高密度脂蛋白膽固醇。Alirocumab組有69%的患者經(jīng)歷了治療緊急不良事件而依折麥布組的比例為78%， 每組各有1例患者出現(xiàn)嚴(yán)重治療緊急不良事件但他們最后都康復(fù)而且完成了試驗(yàn)。結(jié)果顯示在24 w時(shí)間內(nèi)，Alirocumab比依折麥布有優(yōu)勢(shì)。適當(dāng)心血管風(fēng)險(xiǎn)患者中，每2 w皮下注射Alirocumab75 mg對(duì)于超過(guò)50%患者在降低LDL水平方面都是有效的。Alirocumab表現(xiàn)了與依折麥布相當(dāng)?shù)目赡褪苄院桶踩裕虼丝梢蕴娲勒埯湶汲蔀樗〔荒苣褪芑颊叩膫溥x藥物[17]。

3.3.1.3 ODYSSEY FH STUDIES ODYSSEY研究是一個(gè)由三個(gè)試驗(yàn)（FH1、FH2、HIGH FH）組成的匯編，該研究是隨機(jī)、雙盲、安慰劑控制的，目的是評(píng)估Alirocumab治療FH的效果，試驗(yàn)對(duì)象選取在最大可耐受劑量他汀穩(wěn)定治療≥4 w仍不能控制血脂水平伴或者不伴其他降脂治療的患者[18]， 患者被隨機(jī)分成2：1皮下注射Alirocumab或安慰劑。初級(jí)效果終點(diǎn)為從基線到第24 w計(jì)算得出的LDL百分比改變，這些研究目前仍在進(jìn)行，將會(huì)評(píng)估Alirocumab在治療FH方面的有效性和長(zhǎng)期有效性[18]。

3.3.2 Evolocumab

3.3.2.1 GAUSS-2試驗(yàn) 該試驗(yàn)為隨機(jī)并通過(guò)安慰劑控制的Ⅲ期臨床試驗(yàn)，在不能耐受他汀治療的高膽固醇血癥患者身上比較了皮下注射Evolocumab和口服依折麥布的效果。GAUSS-2表明elovocumab在10～12 w和12 w時(shí)有LDL水平突出的降低，即使用Evolocumab治療的患者較依折麥布更容易達(dá)到LDL-C目標(biāo)水平。肌痛作為治療過(guò)程的主要副作用在約8%的患者中發(fā)生，但同時(shí)肌痛普遍發(fā)生在服用低劑量他汀的患者身上（他汀和非他汀比例為17%與6%）。最后數(shù)據(jù)分析表明Evolocumab在他汀不耐受患者中可以明顯降低LDL的水平，且在高風(fēng)險(xiǎn)患者中經(jīng)Evolocumab治療的患者超過(guò)75%可以達(dá)到低于100 mg/dL的水平，依折麥布組則低于10%。

Evolocumab試驗(yàn)證明大約96%的患者可以耐受該藥。另外，Evolocumab治療收益可以作為L(zhǎng)DL水平明顯上升而他汀不耐受的患者潛在的替代治療手段，同時(shí)也許會(huì)在膽固醇管理方面替代依折麥布等藥物[19]。

3.3.2.2 OSLER 該試驗(yàn)比較了Evolocumab與標(biāo)準(zhǔn)治療（Standard Of Care，SOC）在降LDL水平方面的長(zhǎng)期效果。參與者被隨機(jī)以2：1樣式分成兩個(gè)治療組，并接受每四周注射一次Evolocumab420 mg和SOC（736例）或單獨(dú)接受SOC（368例），接受Evolocumab治療較基線水平相比LDL-C有持久穩(wěn)固的降低。試驗(yàn)結(jié)果表明肌氨酸激酶和轉(zhuǎn)移酶升高并不明顯，患者多出現(xiàn)頭痛、頭暈、失眠、背痛等癥狀，并且有一例患者在Evolocumab及SOC組試驗(yàn)期間死亡，但是這位患者有明確的冠心病病史；另外，在持續(xù)5個(gè)月的OSLER試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)一例心室動(dòng)脈瘤患者[20]。總之，該試驗(yàn)表明持續(xù)52周的試驗(yàn)可以觀察到LDL水平明顯降低，Evolocumab和SOC配合使用治療高膽固醇血癥比單獨(dú)使用SOC更有效。

3.3.2.3 RUTHERFORD 試驗(yàn)屬于多中心的Ⅱ期臨床試驗(yàn)，其屬于雙盲、安慰劑控制，涉及全世界20多個(gè)血脂診所，試驗(yàn)主要比較患者接受每4 w一次皮下注射Evolocumab350mg或420 mg或者安慰劑總共觀察12 w時(shí)間。研究結(jié)果表明兩種Evolocumab劑量都比安慰劑在降低LDL-C方面有效，每4 w一次Evolocumab 350 mg和420 mg降低LDL-C的百分比分別為43%和55%，而安慰劑只降低LDL-C水平3%（P

總之，Evolocumab治療組較安慰劑可以更有效的降低LDL-C水平[21]。這個(gè)研究表明在伴他汀治療，伴或不伴依折麥布條件下，Evolocumab均可成為降低雜合子FH患者LDL-C水平的有效輔助手段。

4 結(jié)論

高膽固醇血癥影響廣泛，目前多使用他汀進(jìn)行治療，但是仍有很高比例的患者因?yàn)樗〔荒褪艿葲](méi)有接受合適的膽固醇管理。新批準(zhǔn)的PCSK-9抑制劑已經(jīng)被許多試驗(yàn)證明其有效性和安全性，這類藥的臨床研究目前多在臨床Ⅲ期，其中Alirocumab和Evolocumab最近已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)，這也意味著其他PCSK-9抑制劑在膽固醇治療方面具有很大的潛力。PCSK-9抑制劑將為目前不適合他汀治療的高膽固醇血癥患者提供有效的治療手段。另外，有研究表明小鼠肝細(xì)胞內(nèi)PCSK-9誘發(fā)的LDL-R退化與MMP-2相關(guān)[22]，還有待進(jìn)一步臨床前試驗(yàn)深入研究。

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